吴茱萸碱对人结肠癌hct-116细胞体外增殖和迁移的影响及其作用机制的研究-effects of evodiamine on proliferation and migration of human colon cancer hct - 116 cells in vitro and its mechanism of action.docxVIP

重庆医 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 AMF Autocrine motility factor 自分泌运动因子 Caspase-3 Caspase-3 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白 酶 3 CCK-8 Cell Counting Kit-8 细胞计数试剂盒 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 KD Kilodalton 道尔顿 EVO Evodiamine 吴茱萸碱 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 FCM Flow cytometry 流式细胞术 IC50 Half inhibitory concentration 半数抑制浓度 JAK2 Janus tyrosine kinase 2 Janus 酪氨酸酶 2 MMP-3 Matrix metalloproteinase-3 基质金属蛋白酶 3 mg Milligram 毫克 OD Optional density 光密度 PAGE polyacrylamide gel eletrophresis  聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PGI Phosphoglucose isomerase 磷酸葡萄糖异构酶 PVDF Poly vinylidene fluoride 聚偏二氟乙酸 rpm Rounds per minute 转每分钟 SDS Sodium Dodecyl Sulfate 十二烷基磺酸钠 STAT3 Signal transducers and activators of transcription 3 Phosphorylated signal transducers  信号转导与活化转录因子 3 磷酸化信号转导与活化转录因 p-STAT3 and activators of transcription 3 子 3 WB Western Blot 蛋白质免疫印迹法 μmol·L-1 Micromole perliter 微摩尔每升 1 吴茱萸碱对人结肠癌 HCT-116 细胞体外增殖和迁移的 影响及其作用机制的研究 摘 要 结肠癌作为一种常见的胃肠道恶性肿瘤，其发病率居全球常见恶 性肿瘤的第三位[1]。目前临床上治疗人结肠癌的首选方法为化疗，尽管 化疗对癌细胞有直接的杀灭作用，但也会对正常细胞造成一定的损伤 作用且易于复发，导致部分病人因承受不了化疗的痛苦而放弃治疗甚 至因化疗致死。因而寻找新的低毒高效的抗结肠癌药物迫在眉睫。 吴茱萸碱（Evodiamine，EVO）是从吴茱萸干燥果实中提取的生 物碱，近年来的研究表明其对多种肿瘤细胞具有明显的抗肿瘤药物活 性，但缺乏对人结肠癌HCT-116细胞的作用及相关机制的报道。 磷酸葡萄糖异构酶(Glucose Phospho Isomerase，PGI )广泛分布于人 体各组织, 催化6-磷酸葡萄糖与6-磷酸果糖之间的异构化，是糖酵解和 糖生成途径的关键酶[2]。PGI主要在细胞内发挥作用，其在细胞外作为 一种自行分泌的细胞因子被称作自分泌运动因子(Autocrine Motility Factor，AMF)。AMF与其自身表面的受体( Autocrine Motility Factor Receptor, AMFR)在多种肿瘤组织中表达上调，尤其在侵袭性或转移性 肿瘤（如胃肠道肿瘤和乳腺癌）中更为明显[3]。AMF以自分泌的形式 与AMFR结合, 通过细胞信号转导引起肿瘤细胞增殖和血管生成[4]， PGI/AMF的下调可以减少肿瘤的生长和转移[5]。 2 MMPs家族蛋白也参与肿瘤的迁移过程。Wen等报道[6]，PGI可诱 导MMPs家族中MMP-3基因的转录和翻译。另外也有报道称[7-8]，磷酸 化STAT3可以直接与MMP-3启动子结合从而调节核内MMP-3的合成。 由此推断：既然PGI和STAT3都与MMP-3有着密切关系，且MMP-3作为 PGI和STAT3共同的下游蛋白存在，因此，我们提出假设：PGI在STAT3 和MMP-3所致的肿瘤迁移中起到至关重要的作用？ 目的 本文以人结肠癌HCT-116细胞株为研究对象，观察吴茱萸碱对细胞 增殖和迁移的影响。初次尝试探索EVO对HCT-116细胞中PGI、STAT3 和MMP-3的作用，并探讨其可能的作用机制，为临床应用吴茱萸碱治 疗结肠癌提供实验依据和线索。 方法 体外培养人结肠癌HCT-116细胞株分别加入吴茱萸碱1.5，3.0，6.0， 12 μmol·L-1继续培养 24，48和72 h，CCK-8法检测吴茱萸碱对HCT-116 细胞生存活性的影响；采用FCM（Flow