小鼠il33干扰rna逆转录病毒表达载体的构建及其对吸烟引起的小鼠肺部炎症的作用-construction of mouse il33 interfering rna retrovirus expression vector and its effect on lung inflammation caused by smoking in mice.docxVIP

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2018-08-07 发布于上海
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小鼠il33干扰rna逆转录病毒表达载体的构建及其对吸烟引起的小鼠肺部炎症的作用-construction of mouse il33 interfering rna retrovirus expression vector and its effect on lung inflammation caused by smoking in mice.docx

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小鼠il33干扰rna逆转录病毒表达载体的构建及其对吸烟引起的小鼠肺部炎症的作用-construction of mouse il33 interfering rna retrovirus expression vector and its effect on lung inflammation caused by smoking in mice

目录中文摘要………………………………………………………………………………………Ⅰ Abstract………………………………………………………………………………………Ⅲ 缩略词表………………………………………………………………………………………Ⅳ 第 1 章绪论…………………………………………………………………………………1 1.1 IL-33 的研究进展及其生物学功能 ………………………………………………1 1.1.1 IL-33 结构与表达…………………………………………………………1 1.1.2 IL-33 的受体和信号通路…………………………………………………2 1.1.3 IL-33 的生物学特性………………………………………………………2 1.1.4 IL-33 与疾病的关系………………………………………………………3 1.2 RNAi 的研究进展及应用……………………………………………………………4 1.2.1 RNAi 的原理…………………………………………………………………4 1.2.2 病毒载体介导的 RNAi………………………………………………………5 1.2.3 RNAi 的应用…………………………………………………………………6 1.3 COPD………………………………………………………………………………7 1.3.1 吸烟和 COPD 的关系………………………………………………………7 1.3.2 COPD 的发病机制和病理学改变…………………………………………7 1.3.3 COPD 的危害………………………………………………………………8 1.4 本论文的研究意义和技术路线……………………………………………………9 1.4.1 本论文的研究意义…………………………………………………………9 1.4.2 本论文的技术路线…………………………………………………………9 第 2 章 RNAi 逆转录病毒表达载体的构建及鉴定…………………………………………10 2.1 针对小鼠 IL-33 siRNA 的设计与合成……………………………………………10 2.1.1 RNAi 靶序列的选取原则…………………………………………………10 2.1.2 shRNA 序列的设计与合成…………………………………………………10 2.2 实验材料……………………………………………………………………………11 2.2.1 质粒和菌株…………………………………………………………………11 2.2.2 主要试剂……………………………………………………………………12 2.2.3 主要仪器……………………………………………………………………12 2.2.4 溶液的配置…………………………………………………………………13 2.3 实验方法……………………………………………………………………………14 2.3.1 oligo DNA 进行退火………………………………………………………14 2.3.2 pRNATin-H1.4/Retro 质粒转化感受态细菌 DH5α ……………………15 2.3.3 质粒小量提取并酶切鉴定…………………………………………………16 2.3.4 酶切获取大片段……………………………………………………………16 2.3.5 连接…………………………………………………………………………17 2.3.6 转化…………………………………………………………………………17 2.3.7 酶切鉴定……………………………………………………………………17 2.3.8 测序鉴定……………………………………………………………………17 2.4 实验结果……………………………………………………………………………18 2.4.1 pRNATin-H1.4/Retro 酶切鉴定……………………………………………18 2.4.2 pRNATin-H1.4/Retro 质粒提取……………………………………………18 2.4.3 重组质粒的酶切鉴定………………………………………………………19 2.4.4 重组质粒的测序鉴定………………………………………………………19 2.5 小结…………………………………………………………………………………20 第 3 章重组逆转录病毒的包装……………………………………………………………21 3.1 实验材料……………………………………………………………………………21 3.1.1 包装细胞 PT67………………………………………………………………21 3.1.2 主要试剂……………………………………………………………………21 3.1.3 主要仪器………………………………