线虫中skn-1的应激反应研究及涉及自我吞噬的新基因的筛选-study on stress response of skn - 1 in nematode and screening of new genes involved in autophagy.docx

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线虫中skn-1的应激反应研究及涉及自我吞噬的新基因的筛选-study on stress response of skn - 1 in nematode and screening of new genes involved in autophagy

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在 文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保 密□ ,在 年解密后适用本授权书。 不保密□。 (请在以上方框内打“√”) 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 华 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 I I 摘 要 线虫中转录因子 SKN-1 既会增强氧化压力抗性,又对延长寿命发挥了一定的作 用。SKN-1 通过上调与脱毒、清除体内自由基以及其他氧化活性分子有关的基因的 转录水平,进而去抵抗氧化压力对细胞造成的损伤。SKN-1 的这个典型的抗击氧化 压力的反应是进化保守的。在本篇论文中我们揭示了 SKN-1 在维护细胞中的压力防 御中具有更广泛和复杂的作用。当蛋白质合成或降解过程遭到破坏时,SKN-1 协调 特异的保护机制去缓和蛋白质稳态不平衡的局面。当蛋白质的翻译起始或者延伸过 程被扰乱时,SKN-1 上调保护细胞的基因,进而增加细胞自身的压力抗性。当蛋白 酶体基因的表达和活性受损时,SKN-1 激活多个蛋白酶体亚基的表达。此外,在正 常状态的肠组织中,SKN-1 在维持泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system, UPS)活性中发挥了作用。当蛋白酶体的活性被抑制时,SKN-1 对线虫的存活具有 至关重要的作用。然而,在翻译延伸被干扰的时候,SKN-1 却不会上调蛋白酶体基 因的转录,相反,在这个时候 UPS 的活性却是降低的。这些结果揭示了 UPS 活性依 赖于完整的翻译延伸因子复合物。通过酵母中遗传和生化的研究表明蛋白质合成和 降解是偶联的过程。综上所述,SKN-1 在正常生理状态或者 UPS 系统被干扰时,在 增加蛋白酶体表达和 UPS 活性中发挥了关键的组织特异性的作用,同时,在蛋白质 合成被干扰的情况下,SKN-1 可以协调细胞内的维持蛋白质稳态的各种不同的信号 通路。SKN-1 介导的压力反应的特异性,连同明显的协调 UPS 和翻译延伸的功能一 起,都对压力状态下或者疾病环境中蛋白质稳态的维持发挥了重要的作用。我们的 数据揭示了 SKN-1 不仅可以通过增加压力抗性来促进生命的延长,还可能通过维持 蛋白质稳态来达到长寿的效果。 蛋白质降解过程是真核细胞中蛋白质质量控制体系中的一个重要组成部分。在 真核生物中,蛋白质降解的两条主要通路分别是泛素-蛋白酶体系统和自噬。在饥饿 等不利的生存条件下,自噬为细胞和生物体提供重建、再生和修复的原材料和能量, 进而促进机体的存活。本文通过 RNAi 筛选实验鉴定了线虫中 45 个基因可能调节自 II II 噬过程,其中包括 33 个正调节子和 12 个负调节子。 关键词:SKN-1,翻译延伸,泛素-蛋白酶体系统(UPS),氧化压力,压力反应,自 噬 PAGE IV PAGE IV Abstract SKN-1, the C. elegans Nrf1/2/3 ortholog, promotes both oxidative stress resistance and longevity. SKN-1 responds to oxidative stress by upregulating genes that detoxify and defend against free radicals and other reactive molecules, a SKN-1/Nrf function that is both well-known and conserved. Here we show that SKN-1 has a broader and more complex role in maintaining cellular stress defenses. SKN-1 sustains expression and activity of the ubiquitin-proteasome system (UPS), and coordinates specif

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