褪黑素对小鼠胃癌c-myc,p53表达的影响-effect of melatonin on the expression of c - myc and p53 in gastric cancer in mice.docx

万方数据 目 录 中文摘要………………………………………………………………………….. 1 英文摘要………………………………………………………………………….. 3 前言……………………………………………………………………………….. 6 第一部分 褪黑素体外对小鼠前胃癌细胞 MFC 中 c-Myc ,p53 表达的影响 材料和方法………………………………………………………………….. 10 结果………………………………………………………………………….. 20 讨论………………………………………………………………………….. 35 第二部分 褪黑素体内对小鼠胃癌肿瘤组织中 c-Myc ,p53 表达的影响 材料和方法………………………………………………………………….. 39 结果………………………………………………………………………….. 43 讨论………………………………………………………………………….. 52 结论……………………………………………………………………………….. 55 参考文献………………………………………………………………………….. 56 附录一 英文缩略词表…………………………………………………………… 62 附录二 试剂配方………………………………………………………………… 64 在学期间发表的论文及参与课题…………………………………………..…… 66 致谢……………………………………………………………………………….. 67 综述 Hp 感染胃疾病与 Treg 细胞及褪黑素的关系…………………………… 68 参考文献…………………………………………………………………….. 74 本课题受福建省教育厅资助省属高校项目（NO.2005K043，2007F5053）， 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (NO30971541) ， 福 建 省 科 技 重 大 项 目 (NO.2009Y0023)资助。 褪黑素对小鼠胃癌 c-Myc,p53 表达的影响 摘 要 目的 观察褪黑素对小鼠前胃癌细胞 MFC 增殖和凋亡的影响，并通过荷胃癌小鼠 模型研究褪黑素对癌基因 c-Myc 和抑癌基因 p53 表达的影响，探讨褪黑素抑制 肿瘤的一些可能机制。 方法 1. 建立小鼠前胃癌细胞株 MFC 褪黑素干预模型：MFC 细胞传代培养后， 按不同浓度褪黑素干预不同时间分组，分别为：0mM 、2mM 、4mM、6mM 、 8mM 组（24h）；0mM 、2mM 、4mM 、6mM 组（48h）；0mM 、2mM 、4mM 组（72h）。观察细胞形态变化，并进行后续研究。 2. 建立荷胃癌小鼠模型：选用 615 近交系小鼠，MFC 细胞计数后，按 5×105 个细胞/小鼠，右腋皮下注射，一周后，荷瘤模型建立成功，给予不同浓度褪黑 素干预一周：A、荷瘤空白对照组：荷瘤成功后每天腹腔注射生理盐水 100 mg/kg； B、褪黑素低剂量组（25 mg/kg）；C、MLT 中剂量组（50 mg/kg）；D、MLT 高 剂量组（100 mg/kg）。 3. 应用免疫细胞化学染色方法定位细胞 c-Myc 和 p53 蛋白的表达。 4. 应用实时荧光定量 PCR 比较分析褪黑素干预后各组细胞及肿瘤组织中 c-Myc 和 p53 mRNA 表达量的变化。 5. 应用蛋白免疫印迹（Western bolt）技术和图像分析软件分析褪黑素干预 后各组细胞及肿瘤组织中 c-Myc 和 p53 蛋白表达量的变化。 6. 应用免疫组织化学方法定量检测肿瘤组织中 c-Myc 和 p53 蛋白表达量的 变化。 结果 1. 不同浓度褪黑素不同时间干预下各组胃癌细胞生长受到抑制，形态变化 明显，凋亡增加。 1 2. 免疫细胞化学显示，小鼠前胃癌细胞 MFC 中 c-Myc、p53 均在胞核表达， Myc 在胞浆中也有表达。 3. 实时荧光定量 PCR 结果显示：与对照组相比，各褪黑素干预组 MFC 肿 瘤细胞中 c-Myc mRNA 表达减少，除 2mM（48h）组外，各组均有显著性差异； p53 mRNA 表达增加，各组均有显著性差异。与对照组相比，各褪黑素干预组肿 瘤组织中 c-Myc mRNA 表达减少，各组均有显著性差异；p53 mRNA 表达增加， 各组均有显著性差异。 4. Western bolt 结果显示：与对照组相比，各褪黑素干预组 MFC 肿瘤细胞 及肿瘤组织中 c-Myc 蛋白表达均减少，除低剂量组外各组均有显著性差异；各 褪黑素干预组肿瘤细胞 p53 蛋白表达减少，除 2mM 组（24、48h）、4mM 组（48h） 外，各组均有显著性差异。而与对照组相比，各褪黑素干预组肿瘤组织