输尿管逆向注射重组腺病毒介导的bmp-7在大鼠肾间质损害的作用及三七总皂甙干预实验-effect of recombinant adenovirus-mediated bmp - 7 reverse injection into ureter on renal interstitial damage in rats and intervention experiment of panax notoginseng saponins.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要???????????????????????????????Ⅰ ABSTRACT??????????????????????????????Ⅳ 一、前 言?????????????????????????????? 1 二、材料和方法???????????????????????????? 3 （一）主要仪器及试剂???????????????????????? 3 1.主要仪器 ????????????????????????????3 2.主要试剂 ????????????????????????????3 （二）方法 ?????????????????????????????3 1.实验动物及分组 ?????????????????????????4 2.大鼠模型的建立及饲养 ??????????????????????4 3.标本的采集 ???????????????????????????5 4.观察指标 ????????????????????????????5 5.实验方法 ????????????????????????????6 6.数据处理及统计学方法 ??????????????????????11 三、结果 ???????????????????????????????12 四、分析和讨论 ????????????????????????????16 五、结论 ???????????????????????????????20 六、参考文献 ?????????????????????????????21 七、附图 ???????????????????????????????24 致谢 ?????????????????????????????????34 文献综述 ???????????????????????????????35 中文摘要 输尿管逆向注射重组腺病毒介导的 BMP-7 在大鼠肾间质损害的作用及三 七总皂甙干预实验 目的：构建出具有转染后能表达活性的骨形态形成蛋白-7 的重组腺病毒。将已构 建好的重组腺病毒直接导入肾纤维化大鼠肾脏，观察其抗肾纤维化的作用，为腺病毒介 导 BMP-7 的进一步基因治疗提供可靠的实验基础；同时对照研究三七总皂甙对肾间质 纤维化和 BMP-7 的影响与机制。 方法： 无菌级雄性 SD 大鼠 64 只随机分为四组：（1）假手术组（S）：大鼠手术 剖腹后仅游离左侧输尿管但不结扎。（2）单侧输尿管梗阻组（U）：大鼠行手术剖腹， 分离并于肾盂下结扎左侧输尿管。（3）BMP-7 治疗组（B）：大鼠行手术剖腹，自结 扎处以上的输尿管逆行注射包含无菌生理盐水 BMP-7 病毒的混合液，注射后局部压迫片 刻并随即于注射处上方结扎输尿管，在两处结扎之间离断输尿管。（4）三七总皂甙治 疗组（P）：大鼠行手术剖腹，分离并于肾盂下结扎左侧输尿管，术后每晚给予三七总 皂甙（PNS）腹腔注射 1 次,每只大鼠每次注射 100mg/kg。S 组、B 组和 U 组同时给予 同样剂量的蒸馏水，腹腔注射。造模后第 7、14、21、28d 每组处死四只大鼠，取左侧 肾脏进行病理切片观察，并作指标检测。以免疫组织化学方法检测肾组织中 α-SMA 蛋 白的表达水平，以逆转录-多聚酶链反应技术检测 TGF-β1 的表达水平。 结果：光镜下观察，HE及Masson染色S组未见异常。HE染色可见U组、B组及P组 各时相点大鼠肾脏肾小球均无明显变化。U组术后第7天肾小管扩张明显，上皮细胞变性、 水肿、甚至坏死，肾间质大量炎症细胞浸润，间质宽度明显增加，偶见萎缩肾小管；第 14天上述病变加重，可见弥漫的肾小管基底膜增厚皱缩，小管基底膜不同程度断裂，皮 质及外髓萎缩的肾小管较多，间质中大量淋巴单核细胞浸润，纤维化较明显。Masson 染色可见U组术后7天肾小管扩张，肾间质宽度增加，胶原纤维增加，染色加深此后，病 变逐渐加重。P组与B组平行相比肾小管间质病变程度明显减轻，肾间质相对面积明显减 少(P0.01)。三组间比较均有统计学差异(P0.01)。免疫组织化学结果显示：与S组相比， U 组肾小管间质α-SMA表达及肾小管间质损伤指数明显增高（P0.05）。UUO术后7天 I 和14天，可见α-SMA阳性的转化分化小管上皮细胞；术后21天，转分化的小管上皮细胞 明显减少。与U组相比，B组、P组治疗后肾小管间质α-SMA表达显著减少（P0.05）， 并且B组低于P组，（P0.05）。RT-PCR结果显示：TGF-β1随梗阻时间延长而逐渐增多， 第28天，有所下降，但没有统计学意义。在治疗组，B组和P组均比同一识相点U组减