髓系白血病表达trem-1及其微环境调控正常干祖细胞trem-1表达的分析-expression of trem - 1 in myeloid leukemia and analysis of its microenvironment regulating the expression of trem - 1 in normal stem progenitor cells.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 髓系白血病表达 TREM-1 及其微环境调控正常干/祖细胞 TREM-1 表达的研究 摘 要 髓系触发受体（Triggering receptor expressed on myeloid cells，TREM）-1 主要表 达于中性粒细胞和单核细胞表面，能够触发和扩大感染性炎症反应。在细菌、真菌感 染以及败血症、感染性休克情况下，TREM-1 的表达显著上调，而在银屑病、溃疡性 结肠炎、脉管炎等免疫性炎症的情况下，几乎检测不到 TREM-1 的表达。除了调节炎 症反应，TREM-1 还执行其他功能。最近有研究报道称：（1）非小细胞肺癌患者肿瘤 相关巨噬细胞 TREM-1 受体表达异常，且表达水平与非小细胞肺癌的复发和预后相 关；（2）TREM-1 调控肝细胞癌癌肿周围 Kupffer 细胞活性，是 Kupffer 细胞活化以及 肝癌发生的关键因素；（3）TREM-1 表达水平与肝细胞癌癌细胞的恶性行为相关，对 肝细胞癌的预后评估有重要价值；（4）TREM-1 表达水平与粒细胞系和单核细胞系的 发育相关。sTREM-1 是 TREM-1 的可溶性成分，存在于体液中，被认为行使负性调 节 TREM-1 受体信号功能。癌细胞所处微环境和细胞表面分子对白血病的发生发展有 重要影响，我们推测 TREM-1 和 sTREM-1 可能参与髓系白血病机制，但目前尚无 TREM-1 和 sTREM-1 与髓系白血病相关的研究。 骨髓造血受微环境的严格调控以确保生成足量的成熟血细胞和免疫细胞，生成的 细胞反馈影响造血环境，各种造血紊乱与微环境息息相关。当白血病发生时，白血病 患者骨髓中健康的造血干细胞并不是像人们之前所认为的那样逐渐被消除，而是处于 静息状态从而停止自我更新和分化。研究发现小鼠动物模型和患者的骨髓样品含有与 正常对照样品一样甚至更多的正常造血干细胞，但是造血细胞的细胞周期调控因子和 自我更新相关基因表达改变。我们推测白血病环境在基因转录水平调节造血细胞相关 基因的表达并改变其行为，对白血病的发展产生影响。 因此，本文着力研究髓系白血病 TREM-1 和 sTREM-1 的表达情况，以及髓系白 血病环境对正常造血细胞 TREM-1 表达水平的影响，以期揭示 TREM-1 与髓系白血病 的关系，为随后 TREM-1 在白血病的功能和机制研究做铺垫。 第一部分 TREM-1 在髓系白血病表达的研究 目的 本部分旨在探索不同髓系白血病患者、达到完全缓解的慢粒患者和健康志愿者这 几个群体 TREM-1 和 sTREM-1 的表达情况，为后续实验研究白血病微环境对正常造 血细胞 TREM-1 表达水平的影响奠定基础。 方法 于 2012 年 11 月-2013 年 10 月期间在武汉协和医院血液科共收集 77 例患者的骨 髓和外周血标本，其中包括 35 例首诊急性髓系白血病、25 例首诊慢性粒细胞白血病、 17 例慢粒已达到完全缓解。白血病和完全缓解的诊断均以 FAB 分型、免疫分型以及 细胞遗传学联合诊断为依据。另外还收集了 13 例健康的骨髓捐献者的骨髓和外周血 标本。EDTA-K2 抗凝，流式细胞术筛选 CD45+CD34+细胞群并采集细胞表面 TREM-1 的荧光强度值分析其表达情况。ELISA 检测骨髓上清、血浆 sTREM-1 的表达水平。 结果 （1）细胞表面 TREM-1 的表达水平：与正常人相比，急性髓系白血病患者和慢 性粒细胞白血病患者的 CD34+细胞群细胞表面 TREM-1 表达水平均显著降低，但急性 髓系白血病患者与慢性粒细胞白血病患者 CD34+细胞群的 TREM-1 表达水平无显著差 异。髓系白血病细胞系 K562、HL-60、THP-1 细胞也低表达 TREM-1。（2）骨髓上清 和血浆 sTREM-1 的表达水平：与正常人相比，急性髓系白血病患者和慢性粒细胞白 血病患者的骨髓上清和血浆 sTREM-1 的表达水平均显著升高，但急性髓系白血病患 者和慢性粒细胞白血病患者 sTREM-1 的表达水平无显著差异，且骨髓上清和血浆 sTREM-1 的表达水平也无显著差异。（3）完全缓解的慢粒患者 CD34+细胞群 TREM-1 受体表达水平以及骨髓上清和血浆 sTREM-1 的表达水平均与正常人无显著差异。 结论 我们在国际上率先发现髓系白血病 CD34+细胞 TREM-1 受体表达降低，其微环境 中 sTREM-1 水平升高，而完全缓解患者的 TREM-1 和 sTREM-1 和正常人无显著差异， 提示 TREM-1 可能参与髓系白血病病理机制。 第二部分 白血病微环境调节造血干/祖