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LACCLR2细菌漆酶性质及其脱色作用研究 　　摘 要：该试验以LACCLR2细菌漆酶为研究对象，对漆酶的酶学性质以及漆酶对染料的降解脱色效果进行了研究，结果表明：漆酶反应的最适温度是50℃，最适pH为6，铜离子浓度为0.01%时酶活力最高。针对染料的脱色实验，靛蓝最显著，褪色率达到77.4%，COD/BOD提高了43.5%。 　　关键词：细菌漆酶；酶学性质；染料脱色 　　中图分类号 TQ925 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）18-0029-04 　　Study of LACCLR2 Bacterial Laccase Properties and Decolorization 　　Liu Yan1 et al. 　　（1Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou 510520，China） 　　Abstract：In this experiment，LACCLR2 as research subject，we studied its enzymatic properties and dye decolorization，conclusion as below：The optimum reaction temperature is 50℃，The optimum reaction pH is 6，the optimum copper ion concentration is 0.01%. Indigo decolorization most significant effect，decolorization rate is 77.4%. 　　Key words：Bacterial Laccases；Enzymatic properties；Decolorization 　　1 引言 　　漆酶（EC1.10.3.2）又名蓝色多铜氧化酶，是一种含铜的多酚氧化酶，其与植物中的抗坏血酸氧化酶、哺乳动物的血浆铜蓝蛋白都是属于蓝色多铜氧化酶家族[1]。漆酶是一种可催化漆固化过程的蛋白质，由日本学者吉田在漆树的漆液中首先发现。漆酶可以氧化包括酚类、多酚类、苯胺、木质素、多环芳香烃甚至无机物等一系列物质，以分子氧气为电子受体，生成唯一的副产物是水。漆酶在印染废水处理、食品生产等领域具有广泛的应用前景，受到了世界科学界的重视。 　　长期以来，人们一直以为漆酶仅仅存在于真核生物。1993年，Givaudan在水稻根周围的土壤中分离出一株产漆酶的脂固氮螺菌，证实了原核生物也可以产生漆酶[2]。2000年，Alexandre通过生物信息学技术，证实漆酶普遍存在于原核生物中。如今人们在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、抗生链霉菌、交互单胞菌、嗜热栖热菌等多种原核生物中都检测到了漆酶的存在。 　　漆酶主要有三类，分别是植物漆酶、真菌漆酶和细菌漆酶。其中，植物漆酶很难被检测和纯化，真菌漆酶又不耐受高温和碱性环境，而通过对细菌漆酶的研究发现，细菌一般为单体蛋白，具有较好的稳定性，偏向碱性的最适作用pH，抑制剂少，可以克服植物漆酶和真菌漆酶应用的缺点，因而具有巨大的应用潜力。但目前关于细菌漆酶的研究还较少，严重阻碍了细菌漆酶的应用，因此，开展对细菌漆酶的广泛研究具有重要的意义。 　　2 材料与方法 　　2.1 主要材料 　　2.1.1 产漆酶细菌菌种 本课题组提供。 　　2.1.2 试验器皿 三角瓶、烧杯、量筒、试管、玻璃棒、容量瓶、滴管、试管架、比色皿、移液枪、离心管、保鲜膜、pH试纸、培养皿、pH计。 　　2.1.3 试验设备 GT16-3小型台高速离心机（广州市正一科技有限公司）；BCD-222@HC华凌冰箱（华凌集团有限公司）；722G可见光分光光度计（上海仪器分析仪器有限公司）；SW-CJ-2FD双人洁净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）；HR-4数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）；电子天平（广州市正一科技有限公司）；YH系列电热器（江苏建湖近湖镇教学仪器厂）；精密电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；PHS-25实验室pH计（上海虹益仪器仪表有限公司）；高压蒸汽灭菌锅（上海三申医疗器械有限公司）；JY92-IIN超声波细胞破碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。 　　2.1.4 试剂 愈创木酚（阿拉丁）；95%乙醇（天津市富宇精细化工有限公司）；硫酸铜（天津市光复科技发展有限公司）；NaCl（广东环凯微生物科技有限公司）；酵母膏（广东环凯微生物科技有限公司）；蛋白胨（天津市福晨化学试剂厂）；结晶紫（阿拉丁）；橙黄Ⅰ（阿拉丁）；刚果红（阿拉丁）；铬黑T（天津市天新精细化工开发中心）；丽春红S（阿拉丁）；磷酸氢二钾（天津市大茂