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α半乳糖苷酶法合成α半乳糖基β环糊精研究 　　摘要：应用发芽咖啡豆α－半乳糖苷酶法合成α－半乳糖基－β－环糊精，研究其合成工艺。通过Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ设计等方法，得出工艺条件为α－半乳糖苷酶用量７３ ｎｋａｔ，时间２８ ｈ，ｐＨ ６．３，温度４０ ℃，振荡速度７５ ｒ／ｍｉｎ，反应体系包括２ ｍＬ醋酸缓冲液（５０ ｍｍｏｌ／Ｌ），β－环糊精０．４ ｍｏｌ／Ｌ，蜜二糖０．８ ｍｏｌ／Ｌ。在此条件下，α－半乳糖基－β－环糊精绝对产率为２８．４％，比优化前提高了４１．３％。 　　关键词：α－半乳糖苷酶；酶法合成；α－半乳糖基－β－环糊精； 　　中图分类号：ＴＳ２７３ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）19－4041-03 　　 　　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ α－Ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ ｂｙ α－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ 　　 　　ＳＨＥＮ Ｗａｎｇ－ｙａｎｇ１，ＪＩＮ Ｚｈｅｎｇ－ｙｕ２，ＧＡＯ Ｈｏｎｇ３ 　　（１． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００２３， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｊｉａｎｇｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ ２１４１２２， Ｊｉａｎｇｓｕ， Ｃｈｉｎａ；３ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ－aｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ α－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ ｂｙ α－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｏｆ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ ｃｏｆｆｅｅ ｂｅａｎｓ ｗｅｒｅ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ ｄｅｓｉｇｎ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ， ｅｎｚｙｍｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ７３ ｎｋａｔ； Rｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ２８ ｈ； ｐＨ， ６．３； Rｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ４０ ℃； Oｓｃｉｌｌａｔｏｒｙ ｓｐｅｅｄ， ７５ ｒ／ｍｉｎ； β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ， ０．４ ｍｏｌ／Ｌ； ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ， ０．８ｍｏｌ／Ｌ； ａｎｄ ａｃｅｔａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ （５０ ｍｍｏｌ／Ｌ）， ２ ｍＬ， Ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ α－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ ｗａｓ ２８．４％ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ４１．３％ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ before optimization． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： α－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ； ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ； α－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ 　　 　　环糊精（Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ，常见为β－环糊精）具有内疏水、外亲水的特殊性质，在制药、化工、食品等领域被广泛地研究及应用。但其溶解性能不佳，制约了进一步的应用研究。改性制备分支环糊精，可以扩大分子亲水区域，提高溶解性［１－４］。α－半乳糖基－β－环糊精（α－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）是一种分支环糊精，是β－环糊精的衍生物，其具有较高的水溶性，分支上的半乳糖基在动物组织中具有特殊的识别受体，具有广阔的应用前景［５－７］。前期研究工作采用江南大学食品科学与技术国家重点实验室自制的发芽咖啡豆α－半乳糖苷酶（α－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ，ＥＣ ３．２．１．２２）酶法合成得到α－半乳糖基－β－环糊精，并成功地鉴定了其结构。本实验以β－环糊精和蜜二糖为原料，优化发芽咖啡豆α－半乳糖苷酶法合成α－半乳糖基－β－环糊精的工艺，有利于提高酶法合成的产量和效率，进而指导生产。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１试剂发芽咖啡豆α－半乳糖苷酶为江南大学食品科学与技术国家重点实验室自制［８］；对硝基苯酚－α－半乳糖苷（ｐ－Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ－α－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏ ｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ，ＰＮＰＧ）和蜜二糖购于Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（上海）贸易有限公司；其余试剂均为国