RAPD技术在昆虫学研究中应用.docVIP

RAPD技术在昆虫学研究中应用 　　摘要RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）技术自20世纪90年代以来，由于具有简便快捷、灵敏度高和对样品要求不高等优点，在昆虫的系统分类和进化等方面得到了广泛的应用。阐述了RAPD技术的原理与特点，总结了其在昆虫学研究中的应用，以供参考。 　　关键词RAPD技术；原理；特点；昆虫学；应用 　　中图分类号Q965文献标识码A文章编号 1007-5739（2011）01-0030-02 　　 　　ApplicationofRAPDTechnologyinEntomologicalResearch 　　LI Jian-feng 　　（Science and Technology, Weinan Normal University, Weinan Shaanxi 714000） 　　AbstractSince the 1990s，because of a simple and quick，high sensitivity and less demanding on the samples，etc.，RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）technology has been widely used in Entomology systematics and evolution，etc.The technology principles and characteristics were expounded, and its application in entomological research was summarized, so as to provide reference. 　　Key wordsRAPD technology; principle; characteristics; entomological; application 　　 　　1990年，由美国杜邦公司的Williams[1]和加利福尼亚生物研究所的Welsh[2]领导的2个研究小组几乎同时提出了一种新的遗传标记――RAPD，即利用随机引物寻找多态性DNA片段的分子标记。RAPD技术建立在PCR（聚合酶链反应）的基础上，利用随机合成的寡核苷酸序列为引物（一般为10 bp），分别与DNA的2条单链结合，在DNA聚合酶的作用下，对基因组的特定区域进行PCR扩增。扩增的多态性DNA可通过电泳后片段数目的变化来检测，称RAPD图谱，反映了基因组相应区域的多态性。大量的研究表明RAPD具有个体、种群、亚种、种等各个层次水平的特异性，且这种变异是按孟德尔遗传的，因而是一种优良的遗传标记。目前，RAPD标记已广泛应用于生态学和群体生物学中对个体、品种和有争议物种问题的识别、动植物育种、交配机制的研究、生物亲缘关系分析以及家畜经济性状遗传标记和辅助选择的研究等方面。 　　1原理与特点 　　1.1RAPD技术原理 　　RAPD所用的一系列引物DNA序列各不相同，但对于某一特定的引物，其与基因组DNA序列有特定的结合位点。这些特定的结合位点在基因组某些区域内的分布，如符合PCR扩增反应的条件，即引物在模板的2条链上有互补位置，且引物3′端相距在一定的长度范围之内，就可扩增出DNA片段。因此，如果基因组在这些区域发生DNA片段插入、缺失或分子量的改变，通过对PCR产物的检测即可测出基因组DNA在这些区域的多态性。 　　1.2RAPD技术特点 　　RAPD技术继承了PCR效率高、样品用量少、灵敏度高、特异性强和检测较为容易的优点。此外，RAPD技术和其他DNA多态性分析方法相比，还表现出其独特的优势：一是RAPD技术可以在对物种基因组没有任何分子生物学研究的情况下对其进行DNA多态性分析，构建这些物种的基因指纹图谱，并通过统计分析为分类研究提供DNA分子水平的证据，有助于系统学研究中广泛进行物种间比较，这是其他方法（如RFLP）进行此类研究所不能达到的。二是RAPD所用的引物为人工定序合成的，因此可用于任何物种基因组的分析，而且可以应用的引物可以无限多。运用大量的引物，可以对整个基因组进行地毯式分析，2个基因组之间的微小差异也可以反映出来。三是RAPD技术相对其他多态性检测技术更简便易行，可以直接对生物基因组DNA进行多态性分析，因为引物是随机设计的，不需要预先知道特异位点序列的信息，这就避免了Southern杂交中筛选探针的复杂程序，也省去了制备克隆、分子杂交RFLP等方法进行分析时必须进行的准备性工作。四是所需DNA量极少，仅为RFLP需样量的1/2000～1/1000，可以对个体较小或分离DNA较为困难的物种进行基因组多态性分析。