莱克多巴胺的检测－新型瘦肉精检测盒试剂盒说明书.DOCVIP

莱克多巴胺（瘦肉精）检测试剂盒 采用酶联法测定新型瘦肉精Ractopamine试剂盒 测定猪尿中Ractopamine（瘦肉精）的浓度，其检测灵敏度为1ng/mL，与GCMS的相关系数大于98% 产地：美国 简介 β兴奋剂是一种人和兽医作为治疗哮喘的药物。在牲畜中超剂量使用可使脂肪组织转化为肌肉组织，由于能够显著改善脂肪率和生产效率，特别是以瘦肉精为代表的β兴奋剂往往被滥用于畜牧养殖生产中，以此来增加瘦肉型猪的产量，严重威胁着人民群众的食品安全。近年来已经有克伦特罗或其他β兴奋剂中毒的病例报道。近来又有一些非法使用莱克多巴胺来替代克伦特罗作为饲料添加，并存在滥用现象。 适用范围 本法是采用竞争性酶联免疫反应来测定尿液、血清、肝脏、水、饲料和肌肉中莱克多巴胺（瘦肉精）含量的检测。 原理 其主要原理是：吸附在孔内的莱克多巴胺药物抗体与标准品或样品中药物竞争性与药物抗体相结合，未与药物抗体相结合的标准品或样品被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，其再与加入的酶标记的结合物相结合，酶底物在酶作用下产生蓝色产物，该产物在450nm波长下产生较强吸光性。450nm吸光度与样品中药物含量成反比。 四、试剂盒标准配置 莱克多巴胺包被好的96孔板（12条*8孔）*2 标准样品： 0ng、1mL；1ng、1mL；2ng、1mL；5ng、1mL；10ng、1mL 酶联结合物：酶标记的莱克多巴胺 酶联结合物稀释液 十倍浓缩PBS缓冲液 浓缩洗液 显色液 1M盐酸 四、实验中需要但未提供的材料 微量加样器和一次性使用的塑料吸管头 多通道微量加样器（20-300uL） 去离子水 计时表 吸水纸 96孔板酶标仪 1.5mL聚丙烯微量离心管 五、试剂盒储存 本试剂盒应储存于2-8℃的冰箱中。96孔板条在使用前，应始终储存于密封的口袋内。不同批号的溶液和微孔条不能混合使用。微孔板条干燥密封，并和其它所有试剂在4 六、试剂准备 洗液：用去离子水2升溶解所提供的磷酸盐固体 七、标样和样品准备 1．尿样标样准备 在测定尿样时，根据检测程序，在相应的孔内分别加入50uL的标准液。 尿样样品准备 50uL尿样可直接加入微孔进行检测。 2．饲料标样准备 测定时，检测程序，在相应的孔内分别加入50uL每一种标准液（0，1，2，5，10ng/mL）。 饲料样品准备 取3g饲料样品于50mL离心管中，再加入6mL 10%甲醇-PBS样品提取液（即取1体积甲醇到9体积的PBS缓冲液中），上下振荡几次。 再加入6mL碳酸盐缓冲液（15mM Na2CO3+35mM NaHCO3+蒸馏水）体积比为：2：1.5：1.5，调节PH=9.5，可以用NaOH或者HCL调节PH值。 再加入8mL乙酸乙酯。 在摇振器上摇振30分钟。以4000转的转速，离心5分钟。 移取上层有机层于另一新的带盖试管中（注意：在下层呈碱性的水相中含有高浓度的盐，将会对检测反应造成严重污染。故而在移取上层有机层时，不要吸取到下层水相。）。 在摇振器上摇振5分钟后，以4000转的转速离心3-5分钟。 加入1gNa2SO4,如果浑浊，使用滤纸过滤即可。 在摇振器上摇振5分钟后，以4000转的转速离心3-5分钟。 移取上层有机层于另一新的带盖试管中（注意：在下层水相将会对检测反应造成严重污染。故而在移取上层有机层时，不要吸取到下层水相。）。 在50℃ 50uL甲醇溶液溶解残留物后，再加入450uL PBS（注意：对有些样品来说，也许会出现沉淀或混浊液体。在加样前，可将其离心3-5分钟，移取上层清液进行实验）。 取50uL上述溶液，直接加样于微孔中，进行免疫测定。 稀释因子1/6 3．水样标样准备 水样品准备 无需准备，直接加50uL水样进行检测 稀释因子 1 八、药物检测程序：（孵育时间1.5小时） 根据所测定样品及标准品数，计算出所需微孔条数，将微孔条插入微孔架，并将每一微孔条从1到12进行编号。 设计每一标准液和样品在微孔条上的相应位置。标准液和样品都要进行双孔平行测定。 根据设计，在相应的孔内分别加入50uL准备好的标准液和准备好的样品液。 在每一孔中，加入150uL酶联结合物。 轻轻摇动微孔架10秒钟，使得样品混合均匀。 在室温下（20-25℃）孵育1小时，或者37 倒掉孔内液体。每孔内加入300uL工作洗液再倒掉洗液，如此重复洗涤六次，并最后用吸水纸吸干微孔条。 在每孔中，加入200uL底物溶液。 轻轻摇动微孔架，在室温下（20-25℃）孵育30分钟，加入100uL的反应终止液1M 重要的注意事项： 反应时间和温度对检测结果非常重要，培育时间的长短可根据实验员的经验。 加液和加样时间对检测结果非常重要，故除了第3步标准液