HIF―1α与VEGF在稽留流产组织中表达及意义.docVIP

HIF―1α与VEGF在稽留流产组织中表达及意义 　　[摘要] 目的 探讨HIF-1α与VEGF在稽留流产及正常早期妊娠绒毛组织中的表达及意义。 方法 选择早期妊娠（对照组）及稽留流产（实验组）患者各50例，用免疫组化SABC法分别检测两组患者绒毛组织中HIF-1α与VEGF的表达情况。 结果 HIF-1α在对照组中表达阳性率为42%，在实验组表达阳性率为76%，差异有统计学意义（P0.05）；对照组中HIF-1α与VEGF的表达呈正相关（r=0.387，P0.05）。 结论 HIF-1α及VEGF表达异常可能与稽留流产发生有关。 　　[关键词] 稽留流产；HIF-1α；VEGF 　　[中图分类号] R714.43 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）35-0127-03 　　稽留流产是一种特殊类型的自然流产，指宫内胚胎或胎儿死亡未及时排出者，早期者也称胚胎停育。自然流产的发病率约为10%～15%。稽留流产的确切发病率不清楚，有报道称约为流产人数的1%，且有逐年增高趋势[1]。稽留流产的具体病因不明，常见的病因如染色体异常、激素水平异常、内膜容受性低、解剖结构异常、环境污染及特发性稽留流产等。这些病因导致胚胎停止发育的具体机制尚未阐明，目前也没有系统的相关学说。我们周围的空气中氧浓度约为21%，而大多数成人器官内氧浓度仅2%～9%（生理性低氧），正常早期胚胎发育也是在低氧环境中完成的[2]。稽留流产的发生是否与胚胎不能适应低氧环境相关，目前国内外研究少有涉及。缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1-alpha，HIF-1α）是主要的氧浓度调节因子，血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是强有力的血管生成因子，两者均在许多生理及病理状态中起作用。本研究通过检测正常早期妊娠及稽留流产患者绒毛组织中HIF-1α和VEGF的表达，探讨稽留流产患者绒毛组织中HIF-1α、VEGF的表达情况及其与稽留流产发生的关系，为稽留流产的发病机制研究提供新的思路。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　选择稽留流产患者50例为实验组，早孕自愿要求终止妊娠患者50例作为对照组。实验组患者年龄18～30 岁，平均 23.6岁，月经周期规律，停经45～60 d，平均50.6 d，经临床妇科检查、血β-HCG、孕酮和B超检查证实为宫内妊娠且胚胎停止发育；对照组患者年龄19～33 岁，平均24.5岁，月经周期规律，停经42～57 d，平均48.1 d，自愿要求终止妊娠，B超提示宫内妊娠，见心管搏动。两组患者的年龄、孕产次、停经天数比较差异均无统计学意义。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本采集 终止妊娠均采用吸宫术。术前行白带常规、血常规、心电图及妇科检查均无明显异常。在负压下（负压400～500 mmHg）行吸宫术采集绒毛组织，并将绒毛组织用生理盐水漂洗干净后置于10%中性福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，连续切片（厚5 μm），行免疫组化检测。 　　1.2.2 免疫组化检测 切片经二甲苯、梯度酒精脱蜡至水，免疫组化采用SABC法，严格按试剂盒（武汉博士德公司）说明书进行，0.3%H2O2甲醇室温孵育30 min，0.1M PBS冲洗5 min×3次，枸橼酸钠修复液微波抗原修复，PBS冲洗，5%正常羊血清37℃孵育30 min，倾去血清，分别滴加一抗HIF-1α与VEGF（武汉博士德公司，1：100），4℃冰箱过夜，PBS冲洗，分别滴加生物素化二抗（1：100）50 μL，37℃孵育30 min，PBS冲洗，滴加SA/HRP（1：100）50 μL，37℃孵育30 min，PBS冲洗，新鲜配制的DAB显色5 min，清水冲洗，苏木素复染，常规脱水、透明、中性树胶封片。以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性切片作为阳性对照。 　　1.2.3 结果判定 ①HIF-1α和VEGF在绒毛组织中的表达 HIF-1α主要表达于滋养细胞和合体滋养细胞的胞浆和间质，少量表达于胞核。VEGF主要表达于滋养细胞和合体滋养细胞的胞浆和间质，在胞核中无明显表达。两者阳性细胞表达均于镜下出现淡棕黄色、棕黄色、棕褐色颗粒。②结果判定[3] 综合显微镜下阳性细胞染色程度及阳性细胞百分比来判断。每张切片随机取5个400倍高倍镜视野，进行染色强度计分和阳性细胞百分比计分。无明显细胞着色为0分，着色呈淡棕黄色为1分，棕黄色2分，棕褐色3分；阳性细胞数无、≤25%、26%～50%、51%～75%、75%分别计0、1、2、3、4分。上述两种计分结果相加，0～1分为阴性（-），2～3 分为弱阳性（+），4～5 分为阳性（++），6～7分为强阳性