mir―223―3p在急性心肌梗死患者血浆中表达特征及临床意义.docVIP

mir―223―3p在急性心肌梗死患者血浆中表达特征及临床意义 　　摘要：目的 观察急性心肌梗死患者血浆mir-223-3p的表达情况，分析血浆mir-223-3p用于急性心肌梗死（AcuteMyoeardialInfraetions，AMI）临床诊断的可能性。方法 选择AMI患者29例，陈旧性心肌梗死患者31例，健康志愿者10例，入院后1h、24h、2d、7d分别抽取肘静脉血。real-timePCR检测mir-223-3p表达水平，改良szasz法检测CK-MB，免疫印记法检测cTnI。结果 AMI患者血浆mir-223-3p表达水平较陈旧性心肌梗死患者及健康组均显著升高（P0.05）。AMI患者入院1h血浆mir-223-3p表达水平已达到峰值，24h后明显降低，第2d基本进入平台期，并持续至第7d，但仍明显高于陈旧性心肌梗死患者与健康组入院时的水平（P0.01）。mir-223-3p表达水平与cTnI和CK-MB均呈正相关，相关系数分别为（r=0.848，P=0.000）、（r=0.804，P=0.000）。结论 mir-223-3p在AMI早期表达水平明显升高，而且拥有较cTnI和CK-MB更早的时间窗，提示mir-223-3p对AMI早期诊断具有一定价值。 　　关键词：急性心肌梗死；mir-223-3p；CK-MB；cTnI 　　随着现代社会生活方式及饮食结构的改变，急性心肌梗死（AcuteMyoeardialInfraetions，AMI）的发病率逐年增加，在我国已成为一种严重危害人民群众健康的重要疾病。因此，对AMI的预防及治疗成为当前一项重要课题。近年来发现的miRNA与多种疾病的发生发展有着极为密切的关系。最近研究表明，miRNA广泛参与调控心血管系统的发育和疾病发生过程，并且具有较高的组织特异性，在外周血中可以稳定存在而不被分解，推测miRNA可能是一个理想的生物检测标志物。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 取得患者知情同意后，收集山东中医药大学附属医院心病科2012年8月～2013年12月，29例AMI患者（参照2012年ESC/ACC/AHA/WHF工作联盟发布修订后的第3版心肌梗死全球统一定义）、31例陈旧性心肌梗死患者、10例老年健康体检者。 　　1.2主要试剂和仪器 低温高速离心机（美国ThermoScientific公司），荧光实时定量PCR仪7300型（美国Appliedbiosystems公司），Trizol（美国Invirotrogen公司），TIANScriptRTKIT反转录试剂盒（北京天根生化科技公司），SYBRPremixExTaqTMreal-time-PCR试剂盒（大连TaKaRa公司），引物由上海生工生物工程有限公司设计合成。 　　1.3指标检测 　　1.3.1标本采集 分别于入院后1h、24h、2d、7d经肘静脉穿刺采集受试者外周血5ml，置于含EDTA的抗凝管中，静置30min；室温3000rpm离心15min，小心提取上清液分装到去RNA酶的EP管中，置于-80℃低温冰箱中保存待用。用于检测cTnI、CK-MB的外周血与用于miRNA提取的外周血同时采集，置于内含促凝剂（惰性分离胶）的真空采血管（BD公司生产）内，及时送化验室检验。 　　1.3.2real-timePCR检测mir-223-3p 按照Trizol途径提取总RNA，紫外测总RNA的纯度及浓度。根据逆转录试剂盒将RNA反转录为cDNA；选用miR-93作为内参，逆转录引物序列如下：miR-223-3p：GSP：5GGGGTGTCAGTTTGTCAAA3，R：5CAGTGCGTGTCGTGGAGT3；miR-93：GSP：5GGCAAAGTGCTGTTCGTG3R：5CAGTGCGTGTCGTGGAGT3，注：GSP是对应miRNA的特异引物，R是与RT引物相匹配的引物。real-timePCR按照说明书进行操作；反应条件为：95℃，10min；40个PCR循环（95℃，10s；60℃，60s（收集荧光））。为了建立PCR产物的融解曲线，扩增反应结束后，按（95℃，10s；60℃，60s；95℃，15s）；并从60℃缓慢加热到99℃（仪器自动进行-RampRate为0.05℃/s）。获得产物扩增曲线与融解曲线及CT值。 　　1.3.3检测CK-MB、cTnI 应用改良szasz法检测CK-MB，采用免疫印记法检测cTnI。 　　1.4统计学分析 采用软件SPSS17.0进行统计学分析，所有数据均以均数±标准差（Mean±SD）表示，计算各样本的△Ct值（目的基因Ct值-内参基因Ct值），各样本的相对定量为2-△Ct，mir-223-3p组间表达差异用2-△△Ct（△△Ct=△C