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ESTSSR分子标记在茶树品种鉴别中应用 摘要：从GenBank数据库中龙井43的EST序列中筛查EST-SSR位点，设计并获得了65对茶树（Camellia sinensis）EST-SSR引物。以鄂茶1号、龙井43、龙井群体、云抗10号、雪芽100、矮丰的基因组DNA为模板，对所设计的65对EST-SSR引物进行筛选。结果表明，65对引物均能扩增出清晰条带，有效扩增率为100%；其中有4对引物的扩增产物在6个样本间具有多态性，能用于6个茶树品种的品种鉴别。关键词：茶树（Camellia sinensis）；表达序列标签（EST）；简单序列重复（SSR）；品种鉴别中图分类号：S571.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）23-5406-03Application of EST-SSR Molecular Markers in Tea Varieties IdentificationZHANG Yi，HU Ding-jin（Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology Research，Hubei Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430064，China）Abstract： EST-SSR loci were screened from EST sequences of Longjing 43 in the NCBI public database， 65 pairs of EST-SSR primers were designed using Primer 5.0 software. The genomic DNA of tea varieties Hubei No.1 tea， Longjing 43， Longjing groups， Yunkang No.10， Xueya 100 and Aifeng were extracted and used as a template to select EST-SSR primers. The results showed that targeted bands of all the 65 pairs of primers were amplified， the amplification rate was 100%. 4 pairs of EST-SSR primers showed polymorphism in the 6 samples， could be used for identification of the 6 tea varieties.Key words： tea（Camellia sinensis）； expressed sequence tags（EST）； simple sequence repeats（SSR）； variety identification茶（Camellia sinensis）是深受广大消费者喜爱的传统农产品，是中国重要的经济作物之一，在国际贸易中也占有较大份额。但目前茶叶市场存在以陈茶代替新茶、低档茶冒充高档茶、非地理标志产品冒充地理标志产品等欺诈行为，严重影响了茶叶市场的运作并损害了广大消费者的利益。采用RAPD[1]、AFLP[2]、ISSR[3]、SSR[4]等分子标记技术对茶树品种进行鉴定和分析，具有重要的研究和经济价值。简单序列重复（Simple sequence repeats，SSR）是以1～8个碱基为基本单元的DNA串联重复序列，这些序列由于重复次数的不同而形成序列长度的多态性。SSR标记具有多态性高、共显性遗传等优点，已被广泛用于遗传图谱的构建、目标基因的标定、品种真实性的鉴定等研究[5，6]。表达序列标签（Expressed sequence tag，EST）是指对cDNA文库随机挑取的克隆进行大规模测序所获得的cDNA的5’或3’端序列，与基因组SSR相比，从EST数据库中直接筛选获得EST-SSR标记较为经济和便捷。随着茶树EST研究工作的开展，公共数据库中积累了大量的茶树EST序列，本研究拟依据数据库中的茶树EST序列设计SSR引物，建立EST-SSR分子标记技术，并对地理标志茶叶品种进行鉴别。1 材料与方法1.1 实验材料于2012年4～5月采集鄂茶1号、龙井43、龙井群体、云抗10号、雪芽100和矮丰6个茶树品种的1芽2叶新梢，其中鄂茶1号采自湖北省农业科学院果树茶叶研究所茶园；龙井43及龙井群体采自杭州龙井村茶园；云抗10号、雪芽100和矮丰采自云南省思茅茶树良种场茶园。采集的样本经液氮速冻处理后保存在-20 ℃备用。1.2 实验方