ESWT对兔激素性股骨头缺血坏死GMP―140TMOPG表达影响.docVIP

ESWT对兔激素性股骨头缺血坏死GMP―140TMOPG表达影响 　　【摘要】 目的：观察兔激素性股骨头缺血坏死体外冲击波疗法（ESWT）干预后，血浆中血小板α-颗粒膜蛋白（GMP-140）、血栓调节蛋白（TM）及骨保护素（OPG）的表达。方法：选取健康成年雄性日本大耳兔50只，激素造模后随机处死2只验证造模成功，其余按随机数字表法分为模型对照组（A组）24只和冲击波治疗组（B组）24只。干预前，两组随机选取8只兔耳动脉采血测血浆GMP-140、TM、OPG含量；ESWT干预第2、4、8周时A、B组各随机选取8只兔，耳动脉采血后处死，测血浆GMP-140、TM、OPG含量；留取股骨头标本行HE染色观察大体病理变化，免疫组化观察股骨头中OPG阳性表达，并进行半定量分析。结果：ESWT干预2、4、8周后，B组血浆中的GMP-140、TM含量较A组均降低（P0.05）；ESWT干预4周、8周时B组血浆中OPG含量较A组均升高（P0.05）。ESWT干预2、4、8周时B组股骨头中的OPG阳性表达较A组均升高（P0.05）。结论：兔激素性股骨头坏死ESWT干预可使血浆中OPG含量增高，GMP-140、TM含量降低，局部坏死区OPG表达增强。 　　【关键词】 股骨头坏死； 体外冲击波； 骨保护素； 血小板α-颗粒膜蛋白； 血栓调节蛋白 　　激素性股骨头缺血坏死（Steroid induced Avascular Necrosis of Femoral Head，SANFH）居非创伤性股骨头缺血坏死诸多病因首位，尽管人工关节置换效果满意，但对于年轻或不能行手术的患者，治疗上仍是骨科的难题。体外冲击波治疗（Extracorporeal Shock Wave Therapy，ESWT）经证实对股骨头缺血坏死有效，但其治疗机制仍不十分清楚[1]。本文旨在观察体外冲击波对GMP-140、TM、OPG表达的影响，探讨体外冲击波疗法的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 健康成年日本大耳兔50只，体重2.5～3.5 kg，雄性（由山西医科大学实验动物中心提供），颗粒饲料分笼喂养。大肠杆菌脂多糖（LPS，Sigma公司）；甲泼尼龙琥珀酸钠（MP，辉瑞公司）；OPG分析试剂盒（上海蓝基生物科技有限公司）；OPG兔抗鼠多克隆抗体（北京中山生物技术公司），GMP-140试剂盒（上海太阳生物技术公司），TM试剂盒（American Diagostica公司），SABC免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；冲击波骨科治疗机（深圳慧康医疗器械有限公司，HK.ESWOAJII型）。 　　1.2 造模及分组 健康成年雄性日本大耳兔50只，造模方法采用Yamamoto法[2]，于兔耳缘静脉注射LPS（10 μg/kg），24 h后重复给药1次；在第2次注射大肠杆菌内毒素后，立即臀肌注射甲泼尼龙琥珀酸钠（40 mg/kg），共3次，每次间隔24 h（每次给药前均测量体重，调整剂量）；注射激素期间青霉素20万单位/kg臀肌注射，预防感染。造模完成后随机选取2只兔予以空气栓塞法处死，留取股骨头，10%甲醛固定，脱钙液进行脱钙，脱钙满意后纵行剖开，石蜡包埋，切片，HE染色，镜下观察股骨头见：部分骨小梁变细，空骨陷窝较多，骨小梁内脂滴较多，证明股骨头有坏死，造模成功。将造模后的动物按随机数字表法分为模型对照组（A组）和冲击波治疗组（B组），每组24只，各组动物相同条件喂养。 　　1.3 ESWT干预 B组麻醉后，股骨头区剃毛、涂抹耦合剂，X线透视定位确定冲击波焦点，电压10.5 kV，频率70次/min，15 min/次，1次/d，共5次，给予冲击波干预。 　　1.4 标本采集与检测 ESWT干预前各组随机选取8只兔耳动脉采血2～4 mL，缓慢加入含有200 μL 20%EDTA-Na2的试管中，离心处理（3000 r/min，离心10 min），取上层血浆，置于-80 ℃冰箱保存；ESWT干预2、4、8周时分别于各组随机抽取8只兔，耳动脉采血2～4 mL后依前法处理后保存；空气栓塞法处死兔，留取股骨头，10%甲醛固定，脱钙液进行脱钙，脱钙满意后纵行剖开，石蜡包埋，切片，HE染色镜下观察股骨头病理变化；切片常规脱蜡、脱水后，SABC法免疫组织化学染色。以已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照，严格按说明书操作。光镜下免疫阳性细胞胞浆呈棕黄色，每个股骨头标本相同部位各切片2张，每张切片在高倍镜（400倍）下随机选取5个非重叠视野，采用BI-2000医学图像分析系统，计算每个视野中阳性染色面积占总视野面积的百分比并求其平均值。血浆中GMP-140、TM、OPG测量严格按照试剂盒说明操作。 　　1.5 统计学处理 采用SPSS 19.0