Livin基因在结肠癌组织芯片中表达及其与Bcl―2相关性研究.docVIP

Livin基因在结肠癌组织芯片中表达及其与Bcl―2相关性研究 　　[摘要] 目的 探讨Livin基因在结肠癌组织芯片中的表达及其与Bcl-2相关性。 方法 选取结肠癌外科手术患者60例，采用免疫组化MaxVisionTM二步法检测结肠癌组织芯片中Livin、Bcl-2基因的表达。另取切缘正常结肠组织芯片25例作对照。 结果 结肠癌组织芯片中Livin基因阳性表达率（63.33%）显著高于切缘正常的结肠组织芯片（24.00%）（χ2=10.93，P0.05），与浸润深度、Duke’s分期和远处转移等密切相关（P0.05或P0.01）。结肠癌组织芯片中Bcl-2基因阳性表达率（68.33%）显著高于切缘正常结肠组织（4.00%）（χ2=29.22，P0.01）。结肠癌组织芯片中Livin基因表达与Bcl-2基因存在明显的正相关（P0.01）。多因素Logistic回归分析提示，浸润深度、Duke’s分期和远处转移进入模型（P0.05）。 结论 Livin基因在结肠癌组织芯片的发病中扮演重要角色，与其恶性侵袭、转移病理过程密切相关。Livin基因与Bcl-2基因的异常表达可能在结肠癌癌变中起协调作用。 　　[关键词] 结肠癌；免疫组化；Livin基因；病理特征 　　[中图分类号] R735.3+5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）35-0021-04 　　结肠癌是临床较常见的消化道恶性肿瘤之一，近年来其发病率有逐年上升的趋势。肿瘤的发生与肿瘤细胞的增生及凋亡受抑制密切相关，尤其是细胞凋亡的调节障碍或表达异常在肿瘤的发生和发展起及其重要的作用。Livin基因是凋亡抑制蛋白（IAPs）家族的新成员，在正常成人组织中无明显的表达或表达较低，近年来研究发现其在大部分肿瘤组织中表达异常[1，2]。Bcl-2是临床较常用的一种凋亡相关基因， 与肿瘤的发生和发展关系密切[3]。Livin基因在结肠癌组织中的表达及其与Bcl-2的相关性研究目前国内外报道较少[3，4]。本研究旨在观察Livin基因在结肠癌组织芯片中的表达及其与Bcl-2的相关性，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取2010年1月～2014年7月我院普外科就诊结肠癌外科手术患者60例。纳入患者：术前具有完整临床资料，且均未进行任何辅助化放疗和免疫治疗。患者中男39例，女21例；年龄38 ～89岁，平均（63.1±7.1）岁。另取切缘正常结肠组织25例作对照研究，其中男16例，女9例；年龄39～86岁，平均（62.9±6.4）岁。结肠癌组与正常结肠组织在性别构成和年龄分布方面比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2 组织芯片的制备 　　用组织陈列仪在模板蜡块上打出直径为2 mm的小孔，选取HE染色下所见典型癌组织区域2 mm柱状组织，按顺序填在模板蜡块中，将蜡块表面压平整，二次包埋后制成组织芯片，4～6 μm连续切片，进行免疫组化染色。 　　1.3 免疫组化染色 　　采用免疫组化MaxVisionTM二步法进行检测，具体步骤参照文献[5]。采用已知阳性片和磷酸盐缓冲液（PBS）分别行阳性对照或阴性对照，其中鼠抗人Livin单克隆抗体及免疫组化MaxVisionTM二步法试剂盒均购买自北京中杉金桥公司，鼠抗人Bcl-2单克隆抗体购自福州迈新生物有限公司。 　　1.4 免疫组化结果判定[6] 　　Livin阳性细胞定位于胞浆，Bcl-2阳性细胞定位于胞膜或细胞浆，以出现棕黄色颗粒为阳性。按照染色百分比和强度判断其结果。其中染色百分比1判断为阳性（+），≤1判断为阴性（-）。 　　1.5 统计学处理 　　应用SPSS16.0软件，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Speaman分析，Livin基因与各因素间的关系采用多因素Logistic回归分析。P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 组织芯片免疫组化染色 　　制作组织芯片各位点排列整齐，厚薄一致，位点结构保持良好，无位点脱落。Livin免疫组化阳性产物呈胞浆棕黄色细颗粒状，Bcl-2免疫组化阳性产物呈胞浆或胞膜棕黄色细颗粒状。 　　2.2 结肠癌及切缘正常结肠组织芯片中Livin基因表达 　　60例结肠癌组织芯片中Livin基因阳性表达38例（63.33%）；而25例切缘癌旁正常结肠中Livin基因阳性表达仅6例（24.00%）。结肠癌组织中Livin基因阳性表达率显著高于切缘正常结肠组织（χ2=10.93，P0.01）。 　　2.3 结肠癌组织芯片中Livin基因表达与病理特征的相关性 　　结肠癌组织芯片中Livin基因表达与性别、年龄、肿瘤大小、组织分化程度和淋巴结转移等无明显相关性（P0