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EMS诱变技术在水稻育种中应用 　　摘 要 综述EMS诱变的原理和关键技术，简述一些EMS诱变技术在水稻育种中的应用。EMS对水稻成熟胚的愈伤组织的诱变、对水稻种子的诱变、对水稻幼穗的突变等；总结了EMS诱变育种技术存在缺点和不足；提出了今后EMS诱变技术应用在水稻育种方面的展望和发展方向。 　　关键词 EMS诱变；水稻；育种 　　中图分类号：S336 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2016）06--03 　　EMS（Ethy Methan Sulfonate）属于一种烷化试剂，是目前公认的一种最为有效且应用比较多的化学诱变试剂。EMS诱变水稻所产生的突变体，后代分离的基因数量很少，且稳定性较好，但不同的株系之间产生的突变类型比较丰富[1]。当前，水稻种质资源库新的基因极其缺乏、遗传资源日益枯竭的状态，采用EMS诱变水稻技术、创造有用目基因有重要意义。对水稻分子育种提供理论基础。 　　1 EMS诱变的原理 　　EMS诱变技术改变DNA的一些结构，通常它带有一个或者多个活性烷基，此烷基可以转移到电子密度高的碱基上，发生烷化反应，置换出氢原子，进而改变氢键的能力，使DNA结构改变。其诱导表现为嘌呤和嘧啶的转换，DNA的N-7位置的H离子被活性烷基取代后，成为一个带正电荷的集团，易发生转变型突变和置换型突变两种遗传效应。EMS诱变原理见图1。 　　图1 EMS诱变原理 　　1.1 转变型突变 　　烷化了的鸟嘌呤（G）不再与胞嘧啶（C）配对，从而造成G≡C碱基对变成T=A碱基对，EMS诱变大部分表现为转换型突变。 　　1.2 置换型突变 　　活化的鸟嘌呤（G）由于糖苷键发生断裂，造成了脱嘌呤，而原来鸟嘌呤的位置成了一个空位，当DNA分子在下一步复制的时候，4种碱基都有可能进入到其互补位置，造成突变，但是这种现象的可能性较小。 　　2 EMS诱变的关键技术 　　EMS具有操作比较简单、突变频率较高、突变专一及多效等优点，其诱变成败的关键技术如下。 　　2.1 适当的诱变剂量 　　处理材料时，用适当的EMS剂量以便于产生较多的变异，减少植株的不必要损伤。诱变过程中对材料造成半致死效应的剂量通常作为诱变的最适剂量，或者设置诱变剂的浓度梯度及时间梯度来筛选最适诱变剂量。 　　2.2 适当的筛选 　　表型筛选鉴定、生物技术、生理生化检测、遗传学分析等方法筛选出产生的突变体。 　　2.3 突变性状的遗传分析及基因定位 　　根据突变后代F2、F3表现性状，分析为主效基因或者是微效基因，然后采用两点测验或者三点测验的方法进行基因定位。微效基因定位一般采用标记分析、区间作图以及复杂区间作图等。 　　3 EMS诱变技术在水稻育种中的应用 　　3.1 EMS对水稻成熟胚的愈伤组织的诱导 　　在一定范围内，随着诱变剂量或者浓度增加，诱变频率也会随之增加，如果超过一定的剂量范围，植株死亡和细胞受损就会极大增加，因而被筛选掉的有利变异也会增加，进而使育种效率降低。 　　朴铁夫、原亚萍[2]等在离体培养条件下，EMS处理水稻成熟胚诱导的愈伤组织，观察处理后愈伤组织的生长变化、细胞染色体畸变和株体的分化情况。设定EMS的浓度梯度且每个梯度设置5次重复后取平均值。结果显示，低浓度EMS处理水稻成熟胚的愈伤组织有刺激生长的作用，而高浓度EMS处理对水稻成熟胚愈伤组织生长则有抑制作用，这种抑制作用随着EMS浓度的增高而加强；伴随着EMS浓度的增高，愈伤组织细胞染色体具有微核细胞数明显增加；从愈伤组织分化出来幼苗的情况看，低浓度EMS处理的愈伤组织分化出来的绿苗明显比对照多，分化率较高，高浓度的EMS处理分化出来的绿苗明显比对照少。其中最高浓度EMS处理的分化率最低。此试验表明，低浓度的EMS处理对水稻成熟胚愈伤组织的生长和分化有促进作用，而高浓度的EMS有抑制作用。低浓度的EMS对细胞呼吸强度及细胞色素氧化酶活性有刺激作用，高浓度EMS则表现为抑制作用。 　　刘丕庆[3]从水稻品种中丹二号的花药和幼穗中分别诱导出二倍体、四倍体的愈伤组织，并利用EMS处理愈伤组织，调查处理的愈伤组织耐盐细胞频率的变化试说明耐盐变异体筛选过程中使用诱变剂的重要。实验经过培养基配制、诱变处理、愈伤组织的筛选、相对生长量、耐盐细胞频率和细胞的计算等方法，测定EMS对愈伤组织生长的抑制作用和EMS处理后愈伤组织耐盐细胞频率的变化。EMS在较低浓度下，愈伤组织生长和对照相差比较少。EMS浓度达到一定浓度，愈伤组织生长会受到抑制，有些愈伤组织变褐死亡且相对生长量约是对照的40%。当EMS浓度达到一定量时，直到接种约20 d才有愈伤块，很多愈伤块已死亡。当EMS浓度达到最大时，所有的愈伤块都死亡。而经EMS处理后的愈伤组织的耐盐细胞频率表