SLP―2基因在乳腺癌细胞系中表达及对MCF―7细胞增殖影响.docVIP

SLP―2基因在乳腺癌细胞系中表达及对MCF―7细胞增殖影响 　　摘 要 人的SLP-2基因在乳腺癌组织的高表达与病人的存活率相关.为了研究SLP-2在乳腺癌中的功能，应用免疫印记的方法检测SLP-2在不同乳腺癌细胞中的蛋白表达水平，发现随着细胞癌化程度的增强其表达也增强. 成功构建pCMV-Myc-SLP-2重组质粒，证明了其在MCF-7细胞的表达，MTT实验结果表明SiRNA转染乳腺癌细胞MCF-7可以抑制细胞增殖，同时发现SLP-2在乳腺癌细胞系中表达量与HER2/nue呈负相关.这些结果为深入研究乳腺癌的发生和发展奠定了基础. 　　关键词 乳腺癌；SLP-2；免疫印记；细胞增殖 　　中图分类号 Q78 文献标识码 A 文章编号 1000-2537（2014）06-0019-05 　　Abstract High-level Human stomatin like protein 2 （SLP-2） expression was associated with significantly decreased survival in breast cancer. To study the function of SLP-2 in breast cancer furtherly， the expression of SLP-2 protein was detected in different breast cancer cells by western blotting， and the expression of its protein in breast cancer cells was found to increase with the increase of the degree of cancer. Recombinant plasmid pCMV-Myc-SLP-2 was successfully constructed and demonstrated that it can express well in MCF-7. The MTT assay showed that the cell proliferation was significantly inhibited after transfection of pCMV-Myc-SLP-2， the expression of SLP-2 was negatively correlated with HER2/nue in MCF-7， thus providing a useful clue to further research on the occurring and development of breast cancer. 　　Key words breast cancer； SLP-2； western blotting； cell proliferation 　　乳腺癌是严重威胁妇女身体健康的常见恶性肿瘤之一，其发生的分子机制尚不明确[1-2].人的Stomatin like protein 2（SLP-2）基因由Wang首先从人心脏cDNA文库中克隆，由10个外显子和9个内含子组成，编码约1.5 kb的mRNA形成含有356个氨基酸的多肽[3].该蛋白在人体组织中都有表达，其中在心脏和骨骼肌中表达较高.研究表明SLP-2在多种恶性肿瘤组织中表达较高，如上皮性卵巢癌组织和食管鳞状细胞癌组织，且有研究报道，SLP-2基因与子宫内膜腺癌细胞生长相关[4-6].有研究表明在乳腺癌组织中，病人的存活率与SLP-2的高表达负相关，因此在乳腺癌的发生中SLP-2基因很可能发挥着重要作用[2，7] .在本研究中，作者通过Western blotting分析SLP-2基因在乳腺癌细胞系中的表达水平，发现癌化程度越高的细胞中SLP-2表达越高，并运用脂质体介导法将外源SLP-2基因转染入人乳腺癌MCF-7细胞系中，使之得到稳定表达，以探讨SLP-2基因在乳腺癌细胞增殖中的作用.这些实验结果为从乳腺癌细胞增殖周期入手来探讨乳腺癌治疗新途径打下了实验基础. 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　大肠杆菌DH5α，细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453均为本实验室保存， pCMV-Myc（载体）为Clontech公司产品；pMD18-T（vector）购自Takara公司；反转录试剂盒及EX TaqDNA聚合酶购自Qiagen公司；各种限制性内切酶以及T4DNA连接酶等购自New England Biolabs公司； LipofectamineTM 2000转染试剂盒和DMEM 培养基购自Invitrogen 公司；