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云南独蒜兰组培快繁技术研究 　　摘 要：目的：通过研究云南独蒜兰种子萌发、小苗增殖和生根的适宜培养基，建立一套独蒜兰组织培养的快速繁殖体系。方法：以独蒜兰种子为外植体，研究激素（6-benzylaminopurine和1-naphthlcetic acid） 不同质量浓度配比对云南独蒜兰小苗增殖和壮苗生根的影响。结果：云南独蒜兰小苗增殖最适培养基为 1/2MS+NAA1.5mg/L+6-BA0.5mg/L，壮苗与生根最适培养基为 1/2MS+NAA2.0mg/L+6-BA0.3mg/L。结论：建立了一套云南独蒜兰组培快繁体系，可用于大规模生产云南独蒜兰组培苗。 　　关键词：云南独蒜兰；种子；组培快繁 　　中图分类号 S63 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）01-0010-03 　　Abstract：Objective To explore suitable culture mediums for the seed germination，seedling multiplication，rooting and growth of plantlet in Pleione yunnanensis，in order to establish a tissue culture and rapid propagation system.Methods Seeds of Pleione yunnanens is were used as the explants，and the effects of different mediums on proliferation，rooting and seedling. Results The most suitable culture medium for proliferation was 1/2MS+NAA1.5mg/L+6-BA0.5mg/L，The most suitable culture medium for rooting and seedling was 1/2MS+NAA2.0mg/L+6-BA0.3mg/L。Conclusion This research established a tissue culture and rapid propagation system，which could be used for the large scale production of Pleione yunnanensis. 　　Key words：Pleione yunnanensis；Seed；Tissue culture and rapid propagation 　　云南??蒜兰〔Pleione yunnanensis（Rolfe）Rolfe〕，兰科独蒜兰属的一种半附生兰，国内主要产于四川、贵州和云南[1]，假鳞茎为中药山慈菇的主要来源之一。云南独蒜兰为《中国药典》收载品种，具有清热解毒、止咳化痰，止血生肌。主治肺结核，百日咳，气管炎，痈肿，消化道出血，外伤出血等[2]。近年来，由于其含有的秋水仙碱具有抗肿瘤的活性，独蒜兰市场需求量不断增加。但其种子小，自然状态下很难成功萌发及生长，加之野生资源破坏严重，所以通过组织培养是获得大量完整再生植株的重要技术手段，亦是缓解资源环境压力的主要途径。近年来有少量关于独蒜兰组织培养方面的报道，如陈之林等人对白花独蒜兰进行了组培快繁研究，以种子和原球茎为外植体成功获得了组培苗[3]；张燕等人认为，在独蒜兰组培快繁研究中，以种子为外植体生产组培苗是最好的方法[4]。本文就云南独蒜兰组培快繁体系进行了研究，为建立和完善云南独蒜兰的人工繁育技术提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 外植体：以云南独蒜兰成熟且未开裂的蒴果为外植体，采自云南省文山市。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 外植体消毒 用适量洗洁剂先洗涤蒴果6min，然后用无菌水冲净洗洁精，在超净工作台上将洗涤后的蒴果用75%的酒精表面消毒处理2min，再用0.1%的升汞（HgCl2）消毒15min，用无菌水冲洗6次，用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分。 　　1.2.2 无菌播种 超净工作台上用消毒后的手术刀将消毒处理过的蒴果两端切除，纵向剖开蒴果，将种子播于培养基上，轻轻晃动培养瓶使种子均匀散布。完成接种后将其置于培养室培养，诱导种子萌发阶段避光培养，温度为25℃，待种子萌发出原始球茎后采用光照培养，温度为25℃，光照时间12h/d，光照强度1200lx。此阶段培养基为：1/2MS+NAA（1.0mg/L）+炭粉（1g/L）+蔗糖（30g/L）+琼脂（6g/L），pH=5.8。 　　1.2.3 原球茎增殖 在播种40d后极