三肽囊素对鸡血浆蛋白组分及IL2与IL6含量影响.docVIP

三肽囊素对鸡血浆蛋白组分及IL-2与IL-6含量的影响 　　摘要：１４４只１日龄黄羽肉鸡随机分为４组，第７日龄时第Ｉ～ＩＶ组分别注射０、０．００５、０．０１０、０．０３０ｍｇ／ｋｇ剂量的三肽囊素，在１４、３５及５６日龄时每组各取一个重复，取血浆，醋酸纤维薄膜电泳检测血浆蛋白各组分的比率，放射免疫法检测血浆ＩＬ－２与ＩＬ－６的含量。结果显示不同剂量的三肽囊素可提高血浆γ球蛋白水平；对血浆ＩＬ－２的影响呈现前期抑制后期促进的作用；对血浆ＩＬ－６的影响是早期促进，中期抑制，后期又恢复到较高水平。上述结果表明三肽囊素在不同时期通过促进细胞以及体液免疫水平来提高机体的免疫机能。 　　关键词：三肽囊素；蛋白组分；ＩＬ－２；ＩＬ－６ 　　中图分类号：Ｓ８５９．７９＋７文献标识码：A文章编号：１００７－２７３Ｘ（２０11）01-03-0007-03 　　 　　三肽囊素（Bｕｒｓｉｎ，ＢＳ）是由Ａｕｄｈｙａ于１９８６年从鸡法氏囊抽提液中纯化出的一种三肽物质，其氨基酸序列为Ｌｙｓ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ［１］，具有促进免疫器官的发育以及Ｂ淋巴细胞的分化等作用［２，３］。将一定剂量天然提取的或化学合成的三肽囊素与畜禽疫苗联合应用，可以提高疫苗的免疫效果［４－６］。因此，三肽囊素有可能作为一种新型的免疫增强剂应用于畜禽疫苗。然而，三肽囊素提高机体免疫机能的机制目前仍不太清楚。为此，本试验采用化学合成的三肽囊素，研究了不同剂量的三肽囊素对鸡的血浆蛋白组分以及血浆中ＩＬ－２和ＩＬ－６含量的影响，旨在探讨三肽囊素增强机体免疫机能的机理，为三肽囊素作为一种新型的免疫增强剂应用于畜禽疫苗提供试验依据。 　　１材料与方法 　　１．１试验动物分组与处理 　　１４４只体重相近的１日龄黄羽肉鸡（购自佛山市南海种鸡场）随机分成４组，每组３６只，每组３个重复，每个重复１２只，鸡只自由采食与饮水，２４ｈ光照。第７日龄时第Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ组分别注射０、０．００５、０．０１０、０．０３０ｍｇ／ｋｇ剂量的三肽囊素。鸡只在１４、３５及５６日龄时各组随机取一个重复，颈部采血，分离血浆，－２０℃保存，用于检测血浆蛋白各组分以及ＩＬ－２与ＩＬ－６的含量。 　　 　　１．２主要试剂 　　三肽囊素由上海生物化学研究所提供，纯度９９％；ＩＬ－２、ＩＬ－６放射免疫检测试剂盒购自天津九鼎医学生物工程公司。 　　１．３方法 　　１．３．１血浆蛋白组分测定采用醋酸纤维薄膜电泳方法测定［７］，取血浆样品５μＬ滴加至经电泳缓冲液充分浸泡的醋酸纤维薄膜，待血浆渗入膜后进行电泳，电泳完毕将膜浸于氨基黑１０Ｂ染色，然后在漂洗液中洗净，从正极端区分各蛋白条带依次为白蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白，剪下各蛋白条带放入试管，白蛋白管内加０．４ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ ６ｍＬ，其余管内各加３ｍＬ，３７℃水浴２０ｍｉｎ，分光光度计检测ＯＤ６００值，计算血浆中白蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白的比率。 　　１．３．２血浆ＩＬ－２及ＩＬ－６的测定采用放射免疫法，操作按试剂盒说明书。 　　１．４数据统计 　　数据采用ＳＰＳＳ（１７．０）软件进行方差分析和邓肯氏新复极差检验法（ＤＭＲＴ）进行多重比较，试验数据采用平均值±标准差（ｘ±Ｓ）表示。 　　２结果 　　２．１三肽囊素对鸡血浆蛋白组分的影响 　　由表１可以看出，０．０３０ｍｇ／ｋｇ剂量的三肽囊素在１４日龄时显著降低血浆白蛋白水平，而在５６日龄时显著提高血浆白蛋白水平（Ｐ＜０．０５），０．０１０ｍｇ／ｋｇ三肽囊素在３５日龄时显著降低血浆白蛋白水平 　　（Ｐ＜０．０５），其他各剂量对血浆白蛋白水平无显著影响。各剂量三肽囊素５６日龄时均可显著降低血浆α球蛋白的水平（Ｐ＜０．０５）；在１４日龄时，０．０３０ｍｇ／ｋｇ三肽囊素显著提高血浆β球蛋白水平，但到３５日龄时，各组血浆β球蛋白无明显差异；不同剂量三肽囊素均有提高血浆γ球蛋白的趋势，其中第１４日龄时０．００５与０．０３０ｍｇ／ｋｇ以及３５日龄时０．０１０与０．０３０ｍｇ／ｋｇ剂量组显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。 　　２．２三肽囊素对鸡血浆ＩＬ－２含量的影响 　　由表２可以看出，在１４日龄时，中剂量组血浆ＩＬ－２的含量显著低于对照组（Ｐ＜０．０５），低剂量和高剂量组也低于对照组，但差异不显著；在３５日龄时，各处理组之间血浆ＩＬ－２的含量差异不显著；在５６日龄时，低剂量组血浆中ＩＬ－２含量显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），中剂量组和高剂量组也高于对照组，但差异不显著。 　　２．３三肽囊素对鸡血浆ＩＬ－６含量的影响 　　由表３可以看出，在１４日龄时，高剂量组血浆ＩＬ－６的含量显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），低剂量和中剂量组也都高于对照组，但差异不显著；在３５日龄时，高剂量组血浆ＩＬ－６