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不同基因型和培养条件对辣椒花药培养的影响 　　摘要不同基因型和培养条件对辣椒花药培养的影响研究结果表明：不同基因型中板椒极易诱导出胚，诱导率为8.33%，朝天椒较难诱导，诱导率仅为0.17%；不经预处理的花药培养诱导率低，为4.17%，经高温预处理的诱导率为8.75%；高温预处理在8 d时可显著提高花药诱导率。 　　关键词辣椒；花药培养；基因型；培养条件；影响 　　中图分类号S641.3；Q943.1 文献标识码A文章编号 1007-5739（2011）09-0133-01 　　 　　辣（甜）椒为茄科辣椒属植物，其营养价值极高，富含铁、磷、胡萝卜素、脂肪、蛋白质、维生素C等物质。其中维生素C的含量在蔬菜中居首位。干辣椒还富含维生素A，因此具有很高的食用价值。此外，辣椒也具有极高的药用价值[1]。辣椒的果实、茎叶和种子均可入药。现代医学证明，辣椒中的维生素C和胡萝卜素都具有抗癌作用。辣椒中的辣味素能刺激食欲，促进血液循环。辣椒红色素可替代有毒的化学合成色素，这对保障人类的身体健康有重要的意义。 　　近年来由于人们生活水平的提高，以及辣椒生产规模的逐渐扩大，辣椒已成为人们日常生活中主要的食用蔬菜之一。随着辣椒栽培面积的扩大，辣椒生产中出现的品种单一、病虫害严重等问题成为影响辣椒产量的主要因素。而品种改良是解决这些问题、提高辣椒生产水平的重要技术措施之一。按照常规的育种方法，要想培育出1个纯系，需要6~8年的时间，而利用花药培养技术诱导形成单倍体植株，然后加倍成为正常的二倍体植株，在比较短的时间内就可以形成纯系。这样利用花药培养辅助育种，从杂交种的培养到获得纯合亲本一般需要2个世代，比常规育种获得纯系快，可缩短3~5年。因此，这种育种方法具有快速、高效、实用等优点[2]。花药培养的另一个重要意义在于该方法所建立的DH群体在现代遗传育种学上占有很重要的地位。该群体具有遗传上的纯合基因组，是分子标记和基因图谱的理想材料[3]。 　　为缩短辣椒的育种周期、提高育种效率，对影响辣椒花药培养的几个关键因素如高温预处理、基因型等进行研究。现将研究结果报告如下。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　供试辣椒有3个基因型：朝天椒（品种为益都红）、螺丝椒（品种为天椒3号）、板椒（品种为金塔）。供试培养基:以MS为基本培养基，附加3%的蔗糖、琼脂粉0.9%；添加的生长素物质为2，4-D，均在高压灭菌前加入；pH值在高压灭菌前用HCl和NaOH调至5.8左右。 　　1.2样品采集与处理 　　1.2.1取样。供试材料于春季（4月）植于大田中，待现蕾后，选取无病虫害的花蕾。取材时间一般在温度较低、日照较弱的8:00―10:00及以后，以防水分散失过多影响试验结果。为防止温度过高，将取好的材料立即放于保温瓶中，保温瓶内应放有冰块或制冷剂。取花蕾时选择花瓣与花萼近等长或花瓣略长于花萼的花蕾。接种前将所取的材料置于4 ℃的冰箱中保存。在采样过程中，切忌向花蕾喷水保湿，以免加重培养过程中的污染。 　　1.2.2表面消毒。在超净工作台上，花蕾先在75%酒精中浸润30 s左右，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。每次冲洗时间为3 min。消毒过的花蕾置于放有吸水纸的培养皿中（吸水纸和皿均为无菌）。 　　1.3培养方法 　　1.3.1接种方式。接种时用解剖刀将花蕾下端的一定部位切去，露出花药。用镊子将花药取出，置于盛有10 mL MS的固体培养基的培养皿中。切去花蕾时注意不要损伤花药，且尽量不要带花丝。每个皿放有25~30个花药，用镊子将花药均匀分散于培养基表面之后，用无菌培养容器封口膜封口[4-5]。 　　1.3.2培养容器安排。花药的培养采用15 mm×60 mm的培养皿。每皿盛10 mL左右的MS固体培养基。接种5个花蕾，25~30枚花药。幼胚生长培养采用100 mL的三角瓶，各皿所诱导出的花粉胚转移到三角瓶中，若每皿中所出的花粉胚数多于5个，则应分瓶转移，以防与其他处理相混，便于统计结果。转胚后的三角瓶用无菌培养容器封口膜封口。 　　1.3.3灭菌。采用高压蒸汽灭菌、灭菌压力为1.2 kg/cm2，温度为121 ℃，灭菌时间为20~25 min。 　　1.3.4高温与低温预处理。高温培养箱的温度为（34±1）℃，低温培养箱的温度为（6±1）℃，培养室的温度为（25±1）℃。辣椒花药培养接种后，置于高温培养箱或低温培养箱中处理8 d，之后用1层黑布遮光黑暗培养，待幼胚从花药中诱导出来后，利于形态建成。以室温无光培养作对比，研究不同温度预处理对辣椒花药培养的影响。 　　1.3.5温度处理时间。高温培养箱的温度为（34±1）℃，培养室的温度为（25±1）℃。辣椒花药培养接种后，置于高温培养箱中分别作高温处理2、4、8、10 d，之后用