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一个适合松茸菌丝生长的加富培养基 　　本研究根据微测量法测量菌丝生长直径及长度指标确定了一个适合松茸（Tricholoma matsutake）菌丝培养的培养基，培养基配方（g/L）：去皮马铃薯（煮出液）100，葡萄糖 15，酵母浸膏 3，D?惨炝涟彼? 0.15，（NH4）2HPO4 0.25，KH2PO4 0.5，CaCl2 0.05，NaCl 0.03，麦芽糖 0.05，MgSO4?7H2O 0.5，MnSO4 0.2，维生素B1 0.0001，琼脂 30，1% FeCl3 1.2 mL，pH值4.5?? 　　松茸； 菌丝培养； 加富培养基?? 　　S646.190.4??A 　　 　　松茸（Tricholama matsutake）属伞菌目（Agaricales），口蘑科（Tricholomataceae），口蘑属（Tricholoma），是一种的珍稀名贵食用菌，被誉为“菌中之王”，有很高的食用、药用和经济价值。松茸在日本、欧洲被视为食用菌中的珍玉，具有强身、益肠胃、止痛、理气化痰、驱虫的作用，还具有医治糖尿病、抗癌等特殊功效，松茸子实体热水提取物对小白鼠肉瘤180和艾氏癌的抑制率分别达到91.8％和70％。由于松茸特殊的生物学特性，其菌丝体的生长速度比其他种类要慢得多，在人工培养基上培养子实体是不可能的。为确定其适宜的培养条件，国内外展开了大量的研究，为驯化松茸打下了一定的基础。本文针对松茸菌丝的生长要求，在参考目前常用松茸培养基的基础上，对作为松茸菌丝培养基的主要营养构成成分和营养添加成分的碳源及氨基酸进行了优化，找出了对其菌丝生长起到促进作用的合适用量。?? 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1??供试菌株 　　本实验所用的松茸菌种（AY728276）为河南科技大学惠赠，分离自云南松树林松茸子实体，并通过了rDNA分子鉴定。 　　1.2?ε嘌?基改良 　　1.2.1?Ω牧?MMN培养基 　　改良MMN培养基(/L)：去皮马铃薯(煮出液)100 g；KH2PO4 0.5g；NH4H2PO4 0.25g; MgSO4?7H2O 0.5g；CaCl2?2H2O 0.05g；MnSO4 0.2g；麦芽糖 0.05g；NaCl 0.03 g；1%的FeCl3 1.2 mL；琼脂30g；维生素B1 0.0001g。?? 　　1.2.2?ζ咸烟鞘室颂砑优ǘ? 　　在MMN培养基的基础上，在培养基中加入D?惨炝涟彼幔?0.15g/L）［1］，再分别添加0.15g/L和25g/L的葡萄糖，pH 4.5，试验葡萄糖适宜添加浓度。?? 　　1.2.3?ε嘌?pH对松茸菌落影响 　　以上述优化培养基为基础，参考文献［1］对不同松茸菌珠的最适pH，选取pH4.5及6.5试验其对供试菌株生长的影响。?? 　　1.3?ε嘌?及结果统计 　　接种后于24 ℃恒温培养箱中黑暗培养，第4天开始观察松茸菌丝体的生长情况，之后每天进行观察记录，15天后结束。由于松茸菌丝体生长缓慢，而菌丝直径可直接反映菌丝的长势，因此在培养过程中于显微镜下观察测量并记录菌丝直径［2］。每个处理重复7次，每个重复测10个数据取平均值。?? 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2.1?Σ煌?营养条件的培养结果 　　松茸生长极其缓慢，在观测时间内，菌落的生长量不足以用菌落直径等指标来衡量，因此本实验采用了在显微镜下测量菌丝直径及菌丝的生长量来反映松茸菌丝的生长情况。不同葡萄糖添加量的15天培养结果测量数据见表1。 　　 　　从表1可以看出，当葡萄糖添加浓度为??15 g/L时，菌丝体的生长长度大于25 g/L，且差异达到极显著［t(1.99)0.01(3.25)］；而菌丝直径在葡萄糖添加浓度为25 g/L时，数值上大于葡萄糖浓度15 g/L，但差异不显著［t(8.0) t0.05(4.30)t0.01(3.25)］。因此可知，不同葡萄糖添加浓度主要影响松茸菌丝的生长速度，而对菌丝直径的影响相对较小，综上，在葡萄糖添加浓?┒任?15 g/L时菌丝生长好于葡萄糖浓度为25 g/L。?? 　　以MMN培养基作为菌丝培养的对照，在实验阶段内菌丝生长不明显，可见在相同条件下，加富培养基明显优于常用的MMN培养基。?? 　　2.2?Σ煌?pH的培养结果 　　培养基pH为4.5时，松茸菌丝体生长旺盛，菌丝为乳白色，向各个方向生长，由稀疏的菌丝体生长形成致密的球形菌落（图1A）。培养基pH值为6.5时，松茸菌丝体生长迅速，但松茸表面出现褐化现象（图1B）。?? 　　由此笔者认为，在其他生长因子相同时，培养基pH值为4.5时菌丝生长优于pH值6.5，供试菌株更适宜在低pH环境下生长。 　　 　　3 结论 　　 　　通过