不同环境因素对昆明本地灰葡萄孢黄曲霉菌株生长影响.docVIP

不同环境因素对昆明本地灰葡萄孢、黄曲霉菌株生长的影响 　　摘要：对昆明市宜良县玫瑰发病植株上分离获得的1个灰葡萄孢菌株和1个昆明本地土壤中分离的黄曲霉菌株的生物学特性进行了分析。结果发现，昆明花卉致病灰葡萄孢菌株在4～25 ℃条件下均可生长，在25 ℃下生长速度最快，4 ℃时相对较慢，而在37 ℃时生长几乎停止；黄曲霉在4 、37 ℃时生长均受到明显抑制，只在25 ℃时才能正常生长，表明黄曲霉菌株对温度要更加敏感；pH值对于灰葡萄孢菌株的生长影响相对较小，灰葡萄孢在偏酸环境中生长较快；pH值对于黄曲霉菌株的生长影响较大，黄曲霉在中性及偏碱环境中生长明显较快；光照对灰葡萄孢菌株生长的影响大于黄曲霉菌株，这可能和黄曲霉腐生于土壤，对光照刺激不敏感有关；2种菌株在不同培养基上的生长情况表明，两者都可以利用葡萄糖、蔗糖为碳源生长，碳源对灰葡萄孢菌株生长几乎没有影响，而黄曲霉利用葡萄糖的能力要强于蔗糖，因此高葡萄糖环境可能更易于黄曲霉生长。 　　关键词：灰葡萄孢；黄曲霉；温度；pH值；光照；培养基 　　中图分类号：S432.4+4 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0118-03 　　灰葡萄孢是灰霉病的病原菌，在农业生产上会造成严重的经济损失，在气候凉爽潮湿的地区为害尤为严重[1]。它是一类侵染性很强的以腐生为主的真菌，可以侵染200多种植物，其中包括云南省经常种植的花卉、葡萄、番茄、草莓、蔬菜等多种经济作物。除了能引起田间损失，灰葡萄孢在果实的储存和运输中也会造成严重危害，使果实的储存期变短、品质变差，带来经济损失[2-4]。 　　曲霉属真菌是自然界分布最普遍的腐生菌之一，能使农产品变质、霉坏，造成重大的经济损失[5]。据报道土壤中的曲霉资源较为丰富[6]，刘艳梅等曾从甘肃省土壤中分离得到了7个种和3个变种的曲霉菌种[7]。作为贮藏物污染菌，黄曲霉是曲霉属中非常常见的一个种类，其存在于土壤和各类动植物中。此前，有研究发现不同温度对番茄灰葡萄孢孢子萌发的影响很大，其孢子的萌发适温在15～ 25 ℃，最适温度为20 ℃，30 ℃以上病害发展受到抑制。低温有利于病菌产孢，产孢最适温度为15 ℃[8]。此外，还有研究发现番茄灰葡萄孢喜偏酸性的环境，其在pH值3～11的范围内都能生长，pH值为6时菌丝生长最快、产孢量最高[9-10]。黄曲霉是温暖地区常见的占优势的霉菌，菌落生长较快，培养10～14 d，其直径可达6～7 cm[11]。 　　本研究以昆明本地分离得到的玫瑰致病灰葡萄孢菌株和土壤黄曲霉菌株为研究材料，分析其在不同温度、pH值、光照及培养基等环境条件下生长情况，明确昆明本地致病灰葡萄孢、黄曲霉菌株的生物学特性，为了解昆明本地灰葡萄孢、黄曲霉菌株环境适应能力以及制定合理防治策略提供一定的理论参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 灰葡萄孢、黄曲霉菌株的分离、纯化与鉴定 　　供试灰葡萄孢菌株采集自昆明市宜良县发病玫瑰，黄曲霉菌株取样分离于昆明本地土壤。试验用灰葡萄孢菌株采用组织分离法对病原菌分离，黄曲霉菌株则采用常规土壤微生物分离方法分离。此后，得到的各菌株采用已报道方法[12]进一步进行单孢分离，最终按《真菌鉴定手册》进行鉴定。 　　1.2 培养基的制备 　　本试验共采用了3种培养基，培养基的成分如下。PDA培养基：去皮马铃薯40 g、葡萄糖4 g、琼脂4 g、水200 mL；清水琼脂培养基：琼脂4 g、水200 mL；PSA培养基：去皮马铃薯40 g、蔗糖4 g、琼脂4 g、水200 mL。 　　1.3 温度对菌丝生长的影响 　　用灭菌打孔器（直径5 mm）取灰葡萄孢菌株、黄曲霉菌株菌落边缘的菌块，移植到PDA平板培养基中央，分别置于各处理温度下的恒温箱中培养，每24 h测量菌落直径，每个处理重复3次，取平均值。 　　1.4 pH值对菌丝生长的影响 　　试验设4个pH值梯度：5、6、7、8，将熔化好的PDA培养基用1 mol/L盐酸或1 mol/L氢氧化钠调节到所需pH值后（以精密试纸测定），倒平板备用。将灰葡萄孢菌株、黄曲霉菌株分别接种到PDA平板上活化后，用5 mm打孔器在菌落边缘打孔，挑取菌片置于不同pH值的平板中央，在25 ℃下培养，每24 h测量菌落直径，每个处理3次重复，取平均值。 　　1.5 光照条件对菌丝生长的影响 　　试验设计2个处理：全光照、全黑暗。将灰霉菌株、黄曲霉菌株接种到PDA平板上活化后，用5 mm打孔器在菌落边缘打孔，挑取菌片置于PDA平板培养基中央，在试验设定的条件下于25 ℃恒温培养，每24 h测定菌落的直径，每个处理3次重复，取平均值。 　　1.6 不同培养基对菌丝生长的影响 　　培养基设3种处理：PDA培养基、清水琼脂培养基、P