不同粉碎程度对灵芝多糖与三萜提取得率影响.docVIP

不同粉碎程度对灵芝多糖与三萜提取得率的影响 　　以3个品种的灵芝(??Ganoderma lucidum??)子实体为材料，比较了不同粉碎程度对灵芝多糖与三萜提取效果的影响，结果表明，超细粉碎工艺能够有效地破碎灵芝子实体中的菌丝细胞，显著提高灵芝多糖的提取率，但对三萜的提取结果没有影响。 　　灵芝多糖； 三萜； 提取； 超细粉碎 　　 　　灵芝(??Ganoderma lucidum??)是一种滋补强壮、扶正固本的名贵中药，在《神农本草经》中即被列为上品，可用于多种疾病的治疗，其中灵芝多糖和三萜是其主要活性成分，具有提高免疫力、抗肿瘤的作用［1］。由于灵芝木质化程度高，常规提取时一般将子实体粉碎至10~40目［2］，获得的多糖和三萜得率都较低［3,4］。超细粉碎可将材料粉碎至粒径大小300目左右，且粒度分布均匀，在中药制剂加工过程中有较多应用［5］，研究认为，药材经超细粉碎后细胞壁大部分被破坏，从而增加了有效成分的提取率［6,7］，该工艺在食用菌有效成分提取尤其是多糖提取工艺研究中也有报道［8-10］。本研究将超细粉碎与常规粉碎后的材料进行比较并考查不同粉碎程度对灵芝多糖和三萜提取的影响，为灵芝有效成分的工业生产提供参考。?? 　　1 材料与方法 　　1.1材料 　　灵芝(??G. lucidum??)子实体分别为：韩芝，产地浙江，由浙江龙泉兴龙科技开发研究所提供；赤芝156，产地山东，由山东华夏灵芝有限公司提供；沪农灵芝1号，产地安徽，由安徽金寨全顺中药材有限公司提供。子实体于60 ℃烘至恒重后分别用大型粉碎机、中药粉碎机和超细粉碎机（BFM100B，济南倍力粉技术工程有限公司）粉碎；其中用大型粉碎机和中药粉碎机粉碎样品过10目与40目筛，超细粉碎机的粉碎程度为300目（按说明书）。?? 　　1.2不同粉碎程度的灵芝子实体的显微观察 　　使用光学显微镜（Olympus IX71，Olympus，日本）观察粉碎的子实体粉末。?? 　　1.3多糖提取与检测 　　 分别取10 g样品，加250 mL蒸馏水，??100 ℃提取2 h，过滤后上清液用苯酚硫酸法测定总糖含量［11］，并据此计算提取的多糖得率（相对子实体重量）。?? 　　HPLC检测多糖含量 ［12］：上述水提液减压浓缩至1/10体积，13400 ??g??离心20 min，上清液用HPLC进行分析（Waters 600高效液相色谱，Waters公司），以分子量为1400、670、410、270、150 kDa的葡聚糖（dextran系列，Sigma公司）为参照。检测柱为TSK Gel G6000PWXL（??300 mm×7.8 mm），柱温 35 ℃，Waters 2414示差检测器，流动相为0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），流速0.5 mL/min，进样量20 μL。?? 　　1.4三萜的提取与检测 　　分别取10 g样品，加入10 mL 95%乙醇，??40 kHz，20 ℃超声提取（KQ-600B，昆山市超声仪器有限公司）30 min，过滤后上清液用HPLC进行灵芝三萜指纹图谱检测［13］，检测设备同上，使用Waters 2996紫外检测器，检测波长??250 nm，检测柱为YMC-Pack ODS-A（250 mm×4.6 mm），柱温 30 ℃，5‰醋酸水加甲醇??0%~50%梯度洗脱，流速0.5 mL/min，进样量20 μL。?? 　　2 结果与分析 　　2.1光学显微镜镜检不同粉碎程度的灵芝样品 　　?は晕⒐鄄旖峁?表明，在相同粉碎程度下不同品种的显微结构相似，其中10目和40目的灵芝粉在显微镜下为黑色大团块，其小部分细碎样品在显微镜下仍可以看到完整的菌丝体或孢子粉，而超细粉碎之后（300目），细长的菌丝均已被粉碎成较短的片段，已见不到完整的菌丝体或团块（图1）。?? 　　2.2灵芝多糖得率的比较 　　2.2.1苯酚硫酸法检测结果 　　用10目与40目的材料提取多糖其得率为1%~2%，而用300目的材料提取多糖，赤芝156、韩芝、沪农灵芝1号的得率分别提高至（??5.88±0.17）%、（4.76±0.73）%和（3.37±??0.01）%（图2），表明超细粉碎能显著提高多糖的提取得率。?? 　　2.2.2HPLC检测结果 　　HPLC的检测结果表明，不同品种的灵芝子实体超细粉碎后提取的多糖得率都有显著提高，其中，赤芝156的多糖检测图谱如图3所示。分 　　子量为1400、670、410、270、150 kDa的标准品的出峰时间分别是16.33、17.33、17.35、18.27和??18.88 min。图3表明，10与40目这两个处理间的多糖得率差异不大，而超细粉碎能显著提高多糖的提取率。灵