乌司他丁对脓毒症致大鼠急性肾损伤肾功能及尿相关指标影响.docVIP

乌司他丁对脓毒症致大鼠急性肾损伤肾功能及尿相关指标的影响 　　[摘要] 目的 探讨乌司他丁（UTI）对盲肠结扎穿孔术（CLP）所致大鼠脓毒症急性肾损伤（AKI）的保护作用。 方法 SD健康雄性大鼠55只，按随机化原则分成3组：正常对照组5只、模型组25只、乌司他丁治疗组25只，后两组再随机分为5个时间点（1h、6h、12h、24h、48h），每组每时间点各5只，采用盲肠结扎穿孔术复制脓毒症模型，乌司他丁治疗组，造模后立即给予乌司他丁10万U/kg，尾静脉注射，分别在各个时间点采血、留尿标本，进行肾功能血肌酐（Scr）、尿素（Urea），尿肾损伤分子（KIM-1）、白细胞介素-18（IL-18）和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）检测分析。 结果 与模型组相比，乌司他丁治疗组大鼠各时间点Scr、Urea，尿KIM-1、IL-18、NGAL浓度均显著降低，差异均有统计学意义（P0.05）。 结论 乌司他丁对脓毒症所致急性肾损伤具有一定的肾脏保护作用。 　　[关键词] 乌司他丁；脓毒症；急性肾损伤；尿相关指标 　　[中图分类号] R96 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）05-25-04 　　脓毒症并发急性肾损伤（AKI）的发病率为19%～23%，当脓毒症并发急性肾损伤（AKI）时，不仅给有效干预手段带来困难，增加患者死亡率，而且耗费巨大的医疗资源和巨额医疗费用，因此，及早防治脓毒症并发急性肾损伤，保护肾功能意义重大[1]。乌司他丁（UTI）是从尿中分离纯化出来的一种糖蛋白，具有清除自由基、抑制炎症介质释放、改善微循环衰竭状态，抑制蛋白质分解代谢亢进，以及多种蛋白酶活性等药理作用，对多脏器损伤有 　　保护作用[2-4]。本研究通过盲肠结扎穿孔术 （CLP）[5]建立脓毒症大鼠AKI模型，观察乌司他丁对脓毒症所致AKI的肾脏保护作用及其机制，为临床应用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要材料和仪器 　　注射用乌司他丁10万U/支（广东天普生化医药股份有限公司，；肾损伤分子1（KIM-1） ELISA试剂盒（美国RD公司）、白细胞介素18（IL-18） ELISA试剂盒（武汉博士德公司）和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 （NGAL） ELISA试剂盒（上海蓝基生物有限公司）。 　　1.2 实验动物和分组 　　SD健康雄性大鼠55只，清洁级，10～12周，体质量200～250g，由潍坊医学院动物饲养室提供，适应性喂养1周，实验大鼠按随机化原则分成3组：（1）正常对照组（n=5）：尾静脉推注生理盐水2mL；（2） 模型组（n=25）：行CLP；（3）乌司他丁治疗组（n=25）：行CLP后即刻尾静脉推乌司他丁10万U/kg；模型组、乌司他丁治疗组，再随机分为5个时间点（1、6、12、24、48h），每组每时间点各5只，术后均补充生理盐水3mL/100g抗休克。 　　1.3 动物模型制备 　　实验前禁食12h，手术组采用经典的CLP复制脓毒症AKI模型，即用10%水合氯醛0.3mL/100g腹腔麻醉，无菌条件下沿腹中线切开长约2cm，分离、结扎盲肠，在盲端肠壁用12号针穿刺2次，留置1条长1cm宽2 mm、两头贯穿盲肠的橡皮片，挤出少许粪便，将盲肠还纳腹腔，逐层缝合腹壁，编号，清醒后转入代谢笼内自由进水、进食。术毕补充生理盐水3mL/100g，术后自由饮食水。 　　1.4 留取标本 　　从术后腹壁缝合结束开始计时，分别于1、6、12、24、48h取材，下腔静脉抽血5mL，离心（3000 r/min）15min，取血清于-20℃保存，待测Scr、BUN；膀胱分离，膀胱穿刺收集尿标本于-20℃保存，待测KIM-1、IL-18、NGAL。 　　1.5 指标检测 　　采用Roche Cobas 8000全自动生化免疫分析仪（德国Roche公司）测定Scr、Urea。尿液标本均采用Thermo MK3（北京长弓科技有限公司）酶联免疫分析（ELISA）法检测KIM-1、IL-18和NGAL。 　　1.6 统计学处理 　　采用SPSS17.0对数据进行分析，计量资料用（）表示，应用独立样本t检验进行数据处理，P0.05 为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 一般状态 　　模型组大鼠病态明显，蜷缩，活动减少，少食或拒食，呼吸明显加快，反应迟钝，尿量减少等。与模型组相比，乌司他丁治疗组大鼠一般情况病态表现较轻，但较正常对照组差。 　　2.2 大鼠肾功能的变化 　　CLP术后6h，两组大鼠Scr、Urea的浓度开始升高，24h达高峰，48h开始下降，均显著高于对照组（P0.05）。乌司他丁治疗组12、24、48h较模型组相应时间点