薄层色谱分析技术.ppt

薄层色谱法 * 一、色谱法由来 通过色谱分析过程可完成哪些工作？ 分离、定性、定量 色谱分析法实质上是一种物理化学分离方法，即利用不同物质在两相（固定相和流动相）中具有不同的分配系数（或吸附系数），当两相作相对运动时，这些物质在两相中反复多次分配（即组分在两相之间进行反复多次的吸附、脱附或溶解、挥发过程）从而使各物质得到完全分离 * 气液色谱 气固色谱 气相色谱 1、按流动相和固定相的物态分类 二、色谱法的分类 固定相为液体 液相色谱 流动相为气体 流动相为液体 固定相为固体 液液色谱 液固色谱 固定相为液体 固定相为固体 * 2、分离机制分类 吸附 色谱 分配色谱 离子交换 凝胶色谱 色谱法的分类 * 3、操作形式 柱色谱 平面色谱 毛细管柱 不锈钢柱 * 慢 中等 快 三、色谱分离原理——色谱过程 流动相 流动相 流动相 流动相 检测器 记录仪 * 分配系数 组分在固定相 (s) 与流动相 (m) 的浓度 (C) 之比。 三、色谱分离原理——分配系数 K与分离组分、固定相、流动相的性质以及温度有关 K小，先流出色谱柱 K大，后流出色谱柱 分配系数是色谱分离的依据。 不同组分的K值差距越大，则越容易分离 * 分配色谱法 分离机制：不同组分溶解度差异 流动相 载体 支持作用（如硅胶） 固定液 （固定相） * 分离机制：混合物中各组分的吸附能力的差异 分离过程：吸附→解吸→再吸附→再解吸→无数次洗脱→分离 液固吸附色谱法 吸附剂 吸附位点 * 常用的吸附剂 吸附剂 氧化铝 微晶纤维素 硅胶 硅藻土 * 第二节 薄层色谱（Thin Layer Chromatography） 薄层色谱又称薄层层析，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。 常用TLC表示。 属于液-固色谱的一种 * 一、薄层吸附色谱原理 流动相 （展开剂） 起始线 溶剂前沿 分离机制：混合物中各组分的吸附能力的差异，K不同 分离过程：吸附→解吸→再吸附→再解吸→无数次洗脱→分离 固定相：硅胶 流动相：有机溶剂 原点 * 二、比移值的计算 最佳范围：0.3～0.5 可用范围：0.2～0.8 * 吸附剂与展开剂的选择 色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素： 溶 解 能 力 流动相 溶质 吸附 剂 吸附作用 竞争 * 三、操作技术 准备薄层板 点样 展开 显色 * v v v v 展开操作应注意的问题 2 3 1 检查层析缸密闭性 展开前——先饱和，防止边缘效应 展开时，注意展开剂不要浸到点样线 v v v v * 四、观察 物理检出法 化学显色法 日光灯 硫酸 紫外灯 (365或254nm) 荧光板在 紫外灯下观察暗斑 碘 茚三酮 FeCl3 通用显色剂 专属显色剂 * 五、薄层色谱法在药物检验中的应用 定性分析 杂质检查 定量分析 比较比移值和斑点颜色 主成分自身对照法 杂质比较法（有标准品） 直接法 * 杂质检查三种方法的比较 a.杂质对照法 b.自身对照法 c.对照药物法 * 化合物A在薄层板上从原点迁移7.6cm,溶剂前沿距原点16.2cm。 ①计算化合物A的Rf ？ ②在相同的薄层系统，溶剂前沿距原点14.3cm,化合物A的斑点应在此薄层板上何处？ 练习题