低温胁迫下水溶性壳聚糖对甜瓜种子萌发影响.docVIP

低温胁迫下水溶性壳聚糖对甜瓜种子萌发的影响 　　摘要：以甜瓜(哈甜一号)，为实验材料，研究了不同浓度的壳聚糖溶液在不同浓度下浸种,对甜瓜种子萌发及幼苗抗冷性相关生理生化指标的影响。 　　关键词：壳聚糖 甜瓜种子 萌发 幼苗 抗冷性 　　 　　1 概述 　　壳聚糖(Chitosan，简称CS)是由自然界广泛存在的几丁质(chitin)经过脱乙酰作用得到的。研究证明，壳聚糖可以作为植物生长调节剂调节植物生长、增强抗逆性、提高产量和改善品质。本试验采用不同浓度的壳聚糖溶液对甜瓜种子萌发过程某些生理活性的影响进行研究，目的是为解决甜瓜生产上存在的发芽率低、活力低、出苗困难和整齐度差等问题提供技术指标，同时也为壳聚糖在蔬菜生产上的应用提供科学依据。 　　2 试验的材料与方法 　　2.1 试验材料 　　本试验的试材品种是由哈尔滨市农业科学院西甜瓜研究室提供的哈甜一号，种子饱满整齐，于2010年3-5月在哈尔滨市农科院生物中心进行。 　　2.2 壳聚糖溶液的配制 　　称取一定量脱乙酰度≥90%的壳聚糖溶于2%冰醋酸溶液中配制成0.1%和0.3%，0.5%的壳聚糖溶液，pH调至6.5。 　　2.3 甜瓜种子的处理和幼苗培养 　　温汤浸种毒消毒，分别用0.1%、0.3%和0.5%浓度的壳聚糖溶液浸种，对照(ck)用蒸馏水浸种，浸泡8小时后，然后将种子整齐播在铺有两层滤纸的培养皿中加30ml蒸馏水浸润，每皿100粒，放入人工智能培养箱中萌发(完全随机区组排列)，温度处理为30℃和15℃(黑暗)，各处理三次重复。 　　2.4 发芽指标的测定与方法 　　处理后的甜瓜种子放置到培养箱后逐日统计发芽数，按照农作物种子检验国家标准。 　　2.5 生理生化指标的测定 　　选择经过不同浓度溶液浸种的种子播于50孔的的育苗盘中。当甜瓜幼苗长至一叶一心时，选取形态及长势基本一致的甜瓜幼苗各50株，用小型喷雾器将不同浓度的羧甲基壳聚糖溶液均匀喷到甜瓜幼苗的叶片上，处理浓度分别为0（对照，CK）、0.1%、0.3%和0. 5%。每处理用量为500ml，对照喷蒸馏水。 　　隔24h连续处理2次。将幼苗放在6℃下处理6h。3次重复，每重复5株。每次处理结束后，在室温下放置2h，再统一取幼苗第一片真叶进行有关生理生化指标的测定。 　　2.5.1 参照李合生提供的方法进行。 　　细胞膜透性采用电导率法：精确称取甜瓜种子样品5g，放在盛有50mL重蒸馏水的烧杯中，浸泡1h，弃去浸泡液，用滤纸吸干附着的水分，放入装有重蒸馏水的烧杯中，静置在20℃的环境中3h后测定提取液的电导率(L1)，再将样品加热煮沸30分钟杀死组织细胞(损失的水分用重蒸馏水补充)，冷却后再测提取液的电导率(L2)。细胞膜渗透率Le =L1/L2×100％。 　　2.5.2 丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法 　　采用硫代巴比妥酸取甜瓜样品0.5g，加入2mL的10g／100mL的三氯乙酸(TCA)和少量石英砂研磨至匀浆，再加入8ml的TCA进一步研磨，匀浆离心后取上清液2ml，加入2ml的6mg／ml TBA溶液，混匀于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心，取上清液测定OD450、OD532和OD600值。C=6.45 (D532一D600)一0.56D450MDA含量(nmoL／g)=(C×提取液体积稀释倍数)／样品鲜重式中C―MDA浓度(umol／L)OD，OD450，OD532，OD600分别代表450、532和600nm波长下的吸光度值。 　　2.5.3 脯氨酸含量采用磺基水杨酸法 　　经过1.0～4.0mmol?L-1SA浸种和0.05～0.20mmol?L-1SA叶面喷施处理，均能显著增加甜瓜幼苗在高温(40℃) 胁迫下的脯氨酸含量。 　　2.5.4 过氧化物酶(POD)活性采用愈创木酚法 　　酶活性测定的反应体系：依次加入2.9mL0.05mol?L-1磷酸缓冲液；1.0mL2％H2O2； 　　1.0mL0.05mol?L-1愈创木酚和0.1mL酶液。用加热煮沸5min的酶液为对照，反应体系加入酶液后，立即于34℃水浴中保温3 min，然后迅速稀释1倍，470nm波长下比色，每隔1min记录1次吸光度A470，共记录5次，然后以每分钟内A470变化0.01为1个酶活性单位（U）。 　　3 结果与分析 　　3.1 不同浓度的壳聚糖溶液浸种对甜瓜种子萌发的影响 　　经壳聚糖溶液处理的甜瓜种子无论是在正常发芽温度(30℃)还是在低温(15℃)条件下的发芽率、发芽势、发芽指数及活力指数都显著高于对照，其中以0. 3%浓度壳聚糖浸种的效果最佳。另外，低温下甜瓜种子的萌发受到抑制，表现为30℃处理的各发芽指标均高于15℃相应处