大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的共培养研究.PDF

第 １５卷第４期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１５ Ｎｏ４ ２０１７年７月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｕｌ． ２０１７ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１７０４００６ 大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的共培养研究 陈柳霓，李笑寒，田平芳 （北京化工大学 生命科学与技术学院，北京 １０００２９） 摘　 要：为研究大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）和肺炎克雷伯氏菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）混菌体系，构建了基于抗生素 筛选的２ 株重组菌。 将携带卡那霉素抗性基因的载体 ｐＥＴ ２８ａ 转化到肺炎克雷伯氏菌中，获得重组菌Ｋ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ｐＥＴ ２８ａ）；将携带氯霉素抗性基因ｃｍ 的重组载体ｐＥＴ ｃｍ（卡那霉素和氯霉素双抗性载体） 转化到 大肠杆菌中，获得重组菌Ｅ． ｃｏｌｉ（ｐＥＴ ｃｍ），在卡那霉素抗性培养基中单独培养及混合培养上述两株重组菌。 结果 发现：单独培养条件下，Ｅ． ｃｏｌｉ 与 Ｋ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ 的相对菌体密度为 ５７８７％；混合培养条件下，Ｅ． ｃｏｌｉ 与 Ｋ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ 的相对菌体密度为 １９４％；Ｅ． ｃｏｌｉ 和 Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ 相对于各自单独培养的存活率分别为２５７％和 ７６６０％。 上述结果表明，Ｋ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ 为混菌体系的优势菌，可强烈抑制Ｅ． ｃｏｌｉ的生长。 关键词：大肠杆菌；肺炎克雷伯氏菌；混合培养；相对密度；氯霉素；卡那霉素 － － － 中图分类号：Ｑ８１　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１７）０４ ００３４ ０６ Ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ ａｎｄＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＣＨＥＮ Ｌｉｕｎｉ，ＬＩ Ｘｉａｏｈａｎ，ＴＩＡＮ Ｐｉｎｇｆａｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ａｎｄ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ｗｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈａｂｌｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｙ ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓＢｒｉｅｆｌｙ，ｔｈｅ ｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ⁃２８ａ ｈａｒｂｏｒｉｎｇ ｋａｎａｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ （Ｋａｎ ）ｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏＫ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ｌｅａｄｉｎｇｔｏｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｒ ｓｔｒａｉｎ Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ｐＥＴ⁃２８ａ）．Ｔｈｅｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ⁃ｃｍ ｈａｒｂｏｒｉｎｇ ｂｏｔｈ Ｋａｎ ａｎｄ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒ ｇｅｎｅ （ｃｍ） ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ Ｅ． ｃｏｌｉ，ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｔｒａｉｎ Ｅ． ｃｏｌｉ（ｐＥＴ⁃ｃｍ）．Ｔｈｅ ｔｗｏ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｕｎｄｅｒ ｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｄｅｎｓｉｔｙ ｂｅｔｗ