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HPLC分析在中药分析中的应用 摘要：HPLC是一种非常有效并普遍实用的中药分析方法，可用于高分子、极性、离子和热不稳定化合物的分离分析。在中药的定性、定量和杂质检测等方面都发挥了重要的作用，该文综述了高效液相色谱技术在中药材定性、定量分析中的应用。 关键词：高效液相色谱法 沙罗子 金银花 一、HPLC法测定金银花不同部位中木犀草素的含量 金银花是我国传统中药，为忍冬科忍冬属植物忍冬（Lonicera japonica Thunb）的干燥花蕾或待初开的花。其味甘，性寒，具有清热解毒、疏散风热，疏利咽喉、消暑除烦的作用，可治疗暑热症、泻痢、流感、疮疖肿毒、急慢性扁桃体炎、牙周炎等病。金银花主要含有挥发油、有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类、环烯醚萜、苷类和其他无机元素等有效成分。其中，以木犀草素及木犀草苷为代表的黄酮类化合物，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等多种药理作用而备受关注。本文主要介绍了木犀草素在金银花不同部位中的含量。 1. 材料和方法 1.1　仪器和试剂 美国Agilent 1100 型高效液相色谱仪，Agilent 1100 LC化学工作站；超声波提取机（上海思伯明仪器设备有限公司）；电子分析天平（北京赛得利斯公司）。 甲醇、乙腈（色谱纯，天津四友）；石油醚、冰醋酸（分析纯，天津富宇）；浓磷酸（分析纯，洛阳昊华）；水为二次蒸馏水；木犀草素对照品（上海晶纯实业有限公司）；木犀草苷对照品为实验室自制，结构通过UV、IR、NMR等光谱学方法鉴定，纯度经HPLC峰面积归一化法测定大于99％，可做定量分析之用。 1.2 实验方法 1.2.1 对照品溶液的配制 精密称取木犀草素1.8 mg，用甲醇定容至10 mL 的容量瓶中，配制成浓度为0.1800 mg/mL 的对照品溶液。用0.45 um 的滤膜过滤，备用。 精密称取木犀草苷1.0 mg，用甲醇定容至10 mL 的容量瓶中，配制成浓度为0.1000 mg/mL 的对照品溶液。用0.45 um 的滤膜过滤，备用。 1.2.2 供试品溶液的制备 精密称取干燥恒重的金银花4个部位（花、叶、茎的表皮、茎）的样品各5 g，每个平行4份，置索氏提取器中，加入120 mL 的石油醚，浸泡12ｈ，70℃水浴中提取至溶液显无色，挥发干石油醚，之后加入100 mL甲醇，超声提取3次，过滤、浓缩提取液，定容至5 mL 的容量瓶中，即为测定木犀草素的供试品溶液。用0.45 um 的滤膜过滤，备用。 精密称取上述4个部位的样品，同样的制备方法，最后浓缩提取液，定容至10 mL 的容量瓶中，即为测定木犀草苷的供试品溶液。用0.45 um 的滤膜过滤，备用。 2. 结果 2.1 木犀草素的含量测定 2.1.1 色谱条件的选择 色谱柱为Aglient Zorbax SB-C18柱（2.1 mm×150 mm，5 um ）；流动相为甲醇（φ＝0.02％）－磷酸溶液（φ＝50％）；流速为0.3 mL/min ；检测波长3500 nm；柱温30℃。在此色谱条件下，木犀草素对照品和金银花4个部位的木犀草素供试品溶液分别进样，金银花、叶和茎的表皮中木犀草素都能达到基线分离，但茎中没有检测到木犀草素．其色谱图见图1－图5． 2.1.2 线性关系考察 精密吸取浓度为0.1800 mg/mL 木犀草素对照品溶液 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 uL注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积（Y ）为纵坐标，木犀草素对照品的含量（X）为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=-6.2442+5618.6X ，r=0.9996。木犀草素的含量在0.0720～0.288 g 范围 内线性关系良好。 2.1.3 精密度实验 精密吸取同一浓度的对照品溶液，重复进样5次，每次1 uL，测定木犀草素峰面积积分值的RSD为0.92％（n＝5）。 2.1.4 稳定性实验 精密吸取同一浓度的对照品溶液，分别在0，1，2，4，8，12，16，24 h进样1 uL，测定峰面积，结果RSD为1.2％（n＝8）。 2.1.5 重复性实验 精密称取5.0000 g 金银花样品4份，按 1.2 样品制备方法得到木犀草素供试品溶液4份，分别进样3 uL，测定峰面积，结果计算金银花中木犀草素含量的RSD为0.38％。 2.1.6 回收率实验 分别取已测知含量的金银花3个部位供试品溶液1.0 mL，各平行4份，分别加入对照品0.5 mL，分别进样，进行含量测定，计算3个部位的平均加标回收率分别为97.8％，98.6％，95.4％，RSD 为0.91％，1.3％，1.1％。 2