加味芎汤含药血清对ICAM1VCAM1和PS 含量影响.docVIP

加味芎汤含药血清对ICAM1VCAM1和PS 含量影响 　　摘要：目的 观察加味芎?汤含药血清对血管内皮细胞分泌细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞间黏附分子（VCAM-1）和颗粒膜蛋白（PS）含量的影响。方法 体外培养血管内皮细胞，随机将细胞分为DMSO溶媒对照组，AngⅡ模型组，卡托普利对照组，30%、20%、10%、5%加味芎?汤含药血清组,MTT法检测细胞的增殖活性，用Elisa法分别检测细胞培养上清中的ICAM-1，VCAM-1，PS的含量。结果 加味芎?汤含药血清可降低内皮细胞分泌的ICAM-1、VCAM-1，升高内皮细胞分泌的PS。结论 加味芎?汤对血管内膜的黏附能力具有调节的功效。 　　关键词:血管内皮细胞；加味芎?汤；含药血清；大鼠 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）07-0838-02 　　 　　血管内皮细胞的损伤及功能紊乱与高血压、冠心病及糖尿病等多种疾病的发生密切相关，其中，细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、血管细胞间黏附分子-1（vascular cellular adhesion molecule-1,VCAM-1）和颗粒膜蛋白（PS）的含量变化与血管内皮细胞损伤密切相关［1］。本实验以AngⅡ建立血管内皮细胞损伤模型，以加味芎?汤含药血清为干预因素，观察含药血清对血管内皮细胞分泌的ICAM-1、VCAM-1和PS含量的影响，为加味芎?汤治疗与血管内皮损伤相关联的疾病提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验药品 加味芎?汤中之银杏叶、当归、酒大黄、川芎均由山东中医药大学附属医院中药房提供，并经山东中医药大学中药学院中药鉴定教研室鉴定为正品。血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）由美国Sigma公司提供；卡托普利由山东潍坊制药厂提供，批号 　　1.2 试剂 DMEM干粉培养、胎牛血清（FCS）、过氧化氢（H2O2）、胰蛋白酶，3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT），美国Gibco公司产品；二甲基亚砜（DMSO），天津市福辰化学试剂厂；酶联免疫吸附法ICAM-1与VCAM-1和PS测定试剂盒购自美国BPB 生物医学有限公司。 　　1.3 仪器 水套式二氧化碳孵箱，美国Nuaire公司产品；倒置相差显微镜，全自动生化分析仪：AU1000型，日本OLYMPUS公司产品；超净工作台，苏州净化设备公司产品；酶联免疫检测仪，华东电子管厂产品；LX808动力学定量绘图酶标仪,美国宝特原装进口产品。实验用细胞人脐静脉内皮细胞系（ECV-304），购自山东省医学科学院，由美国组织培养库ATTCCCRI-1998引进）。 　　1.4 含药血清制备 雄性Wiatar大鼠10只，加味芎?汤按13.3 g/（kg?d）灌胃给药，连续7 d，于末次给药2 h后，麻醉，取血，无菌分离血清，经56 ℃、30 min灭活后，配置含药血清培养液备用。 　　1.5 细胞培养与分组 采用胰蛋白酶消化传代血管内皮细胞，倒置相差显微镜下观察细胞形态，采用4～6代细胞用于实验。随机分组。①DMSO溶媒对照组;②AngⅡ组：AngⅡ2×10-7 mol/L；③卡托普利组：AngⅡ2×10-7 mol/L＋160 mg/L卡托普利；④30%含药血清组：AngⅡ2×10-7mol/L＋30%含药血清；⑤20%含药血清组：AngⅡ2×10-7 mol/L＋20%含药血清；⑥10%含药血清组：AngⅡ2×10-7 mol/L＋10%含药血清；⑦5%含药血清组：AngⅡ2×10-7mol/L＋5%含药血清，继续培养24 h。 　　1.6 细胞增殖活性测定 将4×104/mL细胞悬液接种于96孔培养板，每孔200 μL（8×103/孔）细胞悬液，同上分组和培养后，每组设4个复孔，继续培养44 h，换含1%血清培养基继续培养24 h后，弃培养液，每孔加入MTT 20 μL （5 mg/mL），温育4 h，每孔加入150 μL DMSO，混匀后于酶标仪波长490 nm处测吸光度（OD），以OD值来表示细胞增殖活性。 　　1.7 细胞培养上清液ICAM-1、VCAM-1和PS含量 采用酶联免疫法（Elisa法）测定ICAM-1、VCAM-1和PS含量。绘制校正曲线，以标准品浓度作纵坐标，OD值作横坐标。 　　1.8 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，方差不齐时采用秩和检验。 　　2 结 果 　　2.1 血管内皮细胞形态观察 低倍光镜下观察可见，内皮细胞贴壁生长。细胞呈单层扁平或多角形细胞。细胞核为圆形或椭圆形，核内染色质