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化学修饰血红蛋白研究概况及进展 　　摘要： 本文简要综述了近几年当中化学修饰血红蛋白研究概况，并介绍了部分种类的修饰剂最新的研究情况，以及在医学等方面的应用和前景。 　　关键词：血红蛋白；化学修饰剂；血液代用品 　　 　　引言： 　　 　　血红蛋白是一种结合蛋白，它是血液完成氧气运输的功能载体，是一种潜在的红细胞代用品。它不仅起到了血浆增量剂的作用，而且还含有蛋白、铁，并且具有携带及交换氧和CO2的功能。无基质血红蛋白溶液(SFHbs)在体内迅速解离为两个二聚体(αβ)很快被肾排出体外。这不但致使其在体内保留时间过短，而且容易形成血红蛋白尿，损伤肾脏。Hb由于不被细胞膜包围，易失去2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)，会使Hb对氧的亲和性增高，不易在组织中释放出氧。为了解决这些问题，化学修饰Hb已经受到了许多研究者的普遍重视。况且使用血液代用品替代传统的输血一直是人们努力研究的方向，化学修饰血红蛋白也成为红细胞代用品的研究热点之一。 　　化学修饰剂种类及进展 　　在近几十年的研究中，科学家们探索了多种修饰剂、交联剂以及双功能试剂对Hb的进行修饰作用，建立了一套基本上完善的化学修饰血红蛋白的研究方法。血红蛋白化学修饰的目的是适当地降低血红蛋白与氧的亲和力，将血红蛋白大分子化，提高纯化后的终产品得率。以下本文将就修饰血红蛋白的化学修饰剂的种类及研究情况做了简要综述。 　　 　　1 磷酸毗哆醛( PLP ) 　　 　　这是一类研究最早也最完善的化学修饰剂。在它的研究中，人们首先揭示了化学修饰血红蛋白氧亲和力降低的原理。PLP的结构式如 　　1.1 所示，它含有一 　　 　　1969年，Bensech等人发现PLP能显著降低血红蛋白的亲和力。1972年，又证明PLP修饰脱氧血红蛋(deoxy Hb)的位点为β链N-末端的缬氨酸残基，修饰deoxy Hb的作用位点为α链的N-末端，但只有对oxyHb的修饰才可以降低血红蛋白的氧亲和力。而且他们还证明了修饰后的血红蛋白，其2,3-PLP结合位点被封闭了。 　　在PLP修饰的脱氧血红蛋白与氧结合时，与磷酸结合的盐桥断裂，形成氧合血红蛋白( Oxy Hb) 。因此，PLPHb既保持了一定的结合氧的能力，又提高了血红蛋白释放氧的能力，并具有一定的载氧能力。 　　单独的PLP修饰的血红蛋白，虽然P50升高了，但易裂解为二聚体。而戊二醛交联的血红蛋白，虽不易降解为二聚体，但P50有所降低。目前最常使用的修饰方法，是将修饰剂与交联剂结合使用，得到基本保持全血的P50 (约为26 Torr)，又不易降解为二聚体的Poly PLPHb 。1983年，Devenuto F.与Zegna A.将PLP修饰的血红蛋白(PLPHb)用戊二醛交联，产物Poly(PLPHb)的P50由23～26mmHg降至19～22mmHg，基本保持了低的氧亲和性，同时小鼠动物灌流实验表明，半保留时间延长到了25小时。在另外一些研究中，实验者改变了修饰条件，以期用最简单的方法得到最满意的结果。如Maudlin D.等人以NaCNBH3代替NaBH4，还原西佛碱得到了氧亲和性更低，高铁血红蛋白含量也较低的产品。Menu PJ.等人研究以磷酸缓冲液代替Tris-HCl进行修饰的反应。得到了满意的结果，推翻了只有在Tris-HCl缓冲液中才能进行蛋白修饰反应的结论。Marshall R.等人以一步法合成了 PLPHb，反应在70℃进行，得到的产品P50为25 Torr，希尔系数正常(2.0-2.2)。Devenuto F.和Zegna A.等人研究了修饰交联浓度最佳化问题，以4：1的PLP修饰，并以7：1的戊二醛聚台，中和人血红蛋白作为修饰对象，结果表明，产物的半保留时间为25小时。 　　 　　2 2-甲酰-5-磷酸吡哆醛(NFPLP) 　　 　　NFPLP是PLP的衔生物，它含有两个醛基，NFPLP是一种重要的双功能试剂。1972年由Pocker,A.首次合成，它既能以一个醛基与血红蛋白的自由氨基形成西佛碱，又可以使血红蛋白形成分子内交联，产生亲和性降低又不易降解的Hb NFPLP。由于Hb NFPLP的氧结合力适中，协同性也非常好，它已引起了科学家的普遍重视。 　　Hb NFPLP进行SDS电泳，结果表明Hb NFPLP的裂解产生了α-单体和β-二聚体，定磷实验表明β-二聚体中含有一分子磷，这就直接证明了交联是发生于两个β链之间，X射线晶体衍射表明，交联是发生于β1链的1位缬氨酸与β2链82位的赖氡酸之间。1987年，Beuelli A.与Brunori M.从动力学角度探讨了NFPLP-Hb与O2及CO 的反应和NFPLP-Hb与O2结合的高度协同性的原因，认为NFPLP-Hb与O2、