嗜鞣管囊酵母发酵条件对纤维素制备乙醇影响.docVIP

嗜鞣管囊酵母发酵条件对纤维素制备乙醇影响 　　摘要： 狗牙根中含有丰富的纤维素，经纤维素酶酶解形成的还原糖通过嗜鞣管囊酵母发酵可以得到生物乙醇。以狗牙根为原料，分析嗜鞣管囊酵母发酵过程中培养时间、接种量、pH值、温度等因素对乙醇得率的影响，探索最佳的发酵工艺条件。结果表明， pH值为5 0、温度40 ℃、嗜鞣管囊酵母菌液（1亿个/mL）接种量0 073 0 mL/g、发酵时间 60 h 为生产乙醇的最佳条件，此时乙醇浓度为5 146 mg/mL。 　　关键词： 生物乙醇；嗜鞣管囊酵母；发酵；纤维素；狗牙根 　　中图分类号：TQ352 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）08-0384 02 　　21世纪，社会经济飞速发展，对能源的需求也越来越大，[JP+1]以煤炭为主的能源消耗结构是我国空气质量不断恶化的主要原因 [1]，寻找新的替代能源是当务之急。生物乙醇是一种新型能源，然而最初生物乙醇的生产主要以玉米、小麦为原料，不仅消耗大量农产品，成本高，而且威胁到国家的粮食安全，影响粮食的正常供应，导致农产品价格上涨等连锁反应 [2-3]。因此，第2代利用纤维素生产生物乙醇的技术引起较大关注 [4]，这不仅可以大大缓解能源压力，也可以避免人和能源之间的争粮现象。狗牙根含有丰富的纤维素，经稀酸预处理，在纤维素酶和木聚糖酶作用下可降解得到还原糖，接种嗜鞣管囊酵母发酵可制备生物乙醇。本试验通过研究pH值、时间、温度、嗜鞣管囊酵母接种量等因素对狗牙根糖化液发酵产生乙醇得率的影响，通过正交试验探索狗牙根糖化液制备乙醇的最佳发酵条件，为狗牙根的开发利用提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1 1 试验材料 　　从河南城建学院图书馆后的山脚下采集成熟的狗牙根（Bermuda grass）植株，洗净烘干，用粉碎机粉碎，过60目筛，密封保存，备用。 　　1 2 主要试剂 　　葡萄糖、盐酸、氢氧化钠，天津市博迪化工有限公司产品；酵母膏、蛋白胨，北京奥博星生物技术有限责任公司产品；纤维素酶、木聚糖酶，和氏璧生物技术有限公司产品。 　　1 3 试验仪器 　　QE-100屹立高速中药粉碎机，武义县屹立工具有限公司生产；FA1004B电子天平，上海越平科学仪器有限公司生产；HWS28型电热恒温水浴锅，上海一恒科学仪器有限公司生产；LDZX-75KBS立式电热压力蒸汽灭菌器，上海申安医疗器械厂生产；PHSJ-3F pH计，上海精密科学仪器有限公司生产；T6新世纪紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司生产；ZFD-A5250生化培养箱、HZQ-L恒温培养摇床，上海智城分析仪器制造有限公司生产。 　　1 4 试验方法 　　1 4 1 pH值测定 称取狗牙根粉末1 g，加入 1%稀盐酸，120 ℃反应60 min；调节pH值为4 2，加入木聚糖酶和纤维素酶酶解，测还原糖的量；根据还原糖含量配制液体培养基，分别调pH值为4 0、4 5、5 0、5 5、6 0；灭菌，接种嗜鞣管囊酵母菌液（1亿个/mL）0 094 9 mL/g，30 ℃摇床培养36 h；蒸馏测定乙醇含量。 　　1 4 2 温度测定 称取狗牙根粉末1 g分装在试管中，加入 1%稀盐酸，120 ℃反应60 min；调节pH值为4 2，加入木聚糖酶和纤维素酶酶解，根据还原糖含量配制液体培养基，调pH值为5 5；灭菌，接种菌液0 094 9 mL/g，分别放于20、25、30、35、40 ℃摇床中培养36 h；蒸馏测定乙醇含量。 　　1 4 3 接种量测定 称取狗牙根粉末1 g分装在试管中，加入 1%稀盐酸，120 ℃反应60 min；调节pH值为4 2，加入木聚糖酶和纤维素酶酶解，根据还原糖含量配制液体培养基，调pH值为5 5；灭菌，分别接种菌液0 029 2、0 051 1、0 073 0、0 094 9、0 116 8 mL/g，放于30 ℃摇床中培养36 h；蒸馏测定乙醇含量。 　　1 4 4 时间测定 称取1 g狗牙根粉末分装在试管中，加入 1%稀盐酸，120 ℃反应60 min；调节pH值为4 2，加入木聚糖酶和纤维素酶酶解，根据还原糖含量配制液体培养基，调pH值为5 5；灭菌，接种菌液0 094 9 mL/g，放于30 ℃摇床中分别培养36、48、60、72、84 h；蒸馏测定乙醇含量。 　　1 4 5 正交试验 在单因素试验基础上设计4因素3水平正交试验（表1），分析狗牙根纤维素发酵制备生物乙醇的最优工艺条件。 　　2 结果与分析 　　2 1 单因素试验 　　2 1 1 pH值对嗜鞣管囊酵母发酵产量的影响 由图1可见，嗜鞣管囊酵母适于在pH值为 4 5～5 0的酸性环境中生长；pH值为5 0时，生产出的乙醇浓度相对较高