地黄类RghBNG基因克隆与生物信息学分析.docVIP

地黄类RghBNG基因克隆与生物信息学分析 　　摘要：RghBNG基因是一种地黄（Rehmannia glutinosa）响应非生物胁迫和植物生长调节剂的基因。类RghBNG基因是一个与RghBNG基因核酸序列同源的地黄基因。克隆了地黄类RghBNG基因，预测其编码蛋白质的性质、结构和功能。用RNA提取试剂盒提取地黄总RNA，反转录成cDNA，根据已知地黄的RghBNG基因碱基序列设计上、下游引物，以cDNA为模板，利用PCR扩增产生包括RghBNG基因和类RghBNG基因在内的5个cDNA片段，其中类RghBNG基因全长1 974 bp，包含一个486 bp的ORF，编码161个氨基酸残基组成的蛋白质；蛋白质等电点为9.45，分子量为18.6 kDa， 二级结构中延伸链占34.78%，无规则卷曲占33.54%，α-螺旋占21.74%，β-螺旋占9.94%，有两个可能的跨膜区，参与翻译和脂肪酸代谢。 　　关键词：地黄（Rehmannia glutinosa）；RghBNG基因；类RghBNG基因；RT-PCR；生物信息学分析 　　中图分类号：Q81 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）15-4014-04 　　DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2016.15.054 　　Abstract： RghBNG gene is a novel abiotic stress and plant growth regulator-responsive gene from Rehmannia glutinosa，while RghBNGLgene is RghBNG-like gene homologous to RghBNG gene at the nucleotide level. RghBNG-like gene was successfully cloned from Rehmannia glutinosa，and predicted byabioinformatics softwares. The total RNA was extracted from Rehmannia glutinosa leaves with RNA extraction kit，and then used as reverse transcriptional template to clone RghBNG-like gene with the same primer pair as that for RghBNG gene. RghBNG-like gene was 1 974 bp long，including a 486 bp ORF，encoding for 161 amino acid residues. The protein isoelectric point and molecular weight are 9.45 and 18.6 kDa. Its secondary structure consists of 34.78% extended strand，33.54% random coil，21.74% alpha helix and 9.94% β-turn. It has two transmembrane helical segments and takes part in translation and fatty acid metabolism. 　　Key words： Rehmannia glutinosa； RghBNG gene； RghBNG-like gene； RT-PCR； bioinformatics analysis 　　地黄（Rehmannia glutinosa）是“四大怀药”之一，为玄参科地黄属多年生草本植物[1]，广泛分布于河南、河北、山东、山西、湖南以及韩国、日本等地[2]。由于特有的土壤、气候条件以及市场影响逐渐形成了以河南武陟、博爱、孟县、温县为中心的黄河流域种植区，其中“怀地黄”（也称“怀参”）最为著名[3]。按照其炮制方法的不同，可将其分为鲜地黄、干地黄与熟地黄，富含梓醇、糖类、生物碱、维生素、多种氨基酸以及铁、磷等成分，可用于治疗头晕、糖尿病、贫血、便秘、泌尿系统等，还具有防癌、抗癌、增强免疫力、增强造血能力等功能[2，4]。同时地黄也有重要的经济价值[5]，在药剂中，地黄的使用量占了很大的比重（如六味地黄丸、知柏地黄丸和杞菊地黄丸等）。在保健方面也已经开发出了一些含有地黄成分的产品（如地黄精、地黄茶和地黄醋等）。 　　目前，有关地黄基因的克隆、功能分析与表达模式的研究已有报道，如采用RT-PCR方法克隆地黄的肌动蛋白