基于体内自组装胶束形成机制探究羊脂油炙淫羊藿对大鼠温肾助阳增效作用お.docVIP

基于体内自组装胶束形成机制探究羊脂油炙淫羊藿对大鼠温肾助阳增效作用お 　　[摘要]淫羊藿传统炮制方法为羊脂油炙，具有增强淫羊藿温肾助阳的作用。该文采用腹腔注射氢化可的松法建立大鼠肾阳虚模型，以大鼠体征，血清睾酮、皮质酮含量，组织病理学检查等为评价指标，研究在辅料羊脂油的作用下，淫羊藿总黄酮在体内自组装形成胶束后对肾阳虚大鼠的增效作用。肾阳虚大鼠灌胃淫羊藿总黄酮和总黄酮胶束后，2组大鼠与模型组相比，体征及各项生化指标趋于正常，下丘脑垂体肾上腺胸腺轴功能紊乱得到有效改善。实验结果表明，淫羊藿总黄酮及其自组装胶束都具有温肾壮阳的作用，其中以炙淫羊藿增强效果为佳。证明在羊脂油作用下，淫羊藿总黄酮可在体内自组装形成胶束，改善下丘脑垂体肾上腺胸腺轴及主要性腺组织睾丸的病理状况，发挥增强淫羊藿温肾助阳的功效，进一步揭示了淫羊藿炮制辅料羊脂油的增效机制。 　　[关键词]羊脂油； 淫羊藿总黄酮； 自组装胶束； 温肾助阳 　　淫羊藿为我国传统的补益中药，生品侧重于祛风湿，炙品可增强温肾助阳的功效[12]。淫羊藿传统炮制方法最早援引于《雷公炮炙论》，“雷公云：凡使，时呼仙灵脾，须用夹刀夹去叶四畔花尽后，细锉，用羊脂相对拌炒过，待羊脂尽为度。每修事一斤，用羊脂四两为度也”。虽然在此之后历代均沿袭了这种炮制方法，但大都只是知其然，不知其所以然。课题组前期分别从“加热”过程促进黄酮类化学成分的改变和辅料“羊脂油”在炮制过程中的作用这2个角度探讨了淫羊藿炮制机制，认为黄酮成分吸收代谢存在差异，次级糖苷的吸收大于多级糖苷，即宝藿苷Ⅰ淫羊藿苷朝藿定A，B，C，淫羊藿炮制后，“加热”使淫羊藿产生更多易于吸收的生物活性黄酮[3]；“羊脂油”中所含的油酸、硬脂酸、棕榈酸、甘油酯等脂肪酸能够在体内与胆酸盐自组装形成平均粒径为（1.685±76） nm的稳定胶束，促进淫羊藿活性黄酮在体内的吸收[46]。炮制后淫羊藿活性黄酮生物利用度显著升高，疗效得到明显增强[78]。 　　本文在前期研究基础上，采用腹腔注射氢化可的松法建立肾阳虚模型，以大鼠体征、血清睾酮、皮质酮、组织病理学检测为指标，探究在羊脂油的作用下，模拟炮制过程，淫羊藿总黄酮形成自组装胶束后，对肾阳虚大鼠温肾助阳增效作用及机制，进一步阐明炮制辅料羊脂油在淫羊藿炮制过程中的作用，为淫羊藿炮制提供理论依据。 　　1材料 　　METTLER AB1.3.5S型电子天平（梅特勒托利多仪器有限公司），85.2型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂），MilliQ纯水机（Millipore，美国），LY202B型旋转蒸发仪（上海礼研化工设备有限公司），KQ5.200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），SpectraMAX1.90型连续光谱酶标仪（Molecular Device，美国），YD6L型全自动生物组织包埋机（浙江金华市益迪医疗设备厂），IX73型奥林巴斯荧光倒置显微镜（OLYMPUS，日本）。 　　淫羊藿总黄酮（西安小草植物科技有限公司，批号xc201.3062.8，纯度80%），羊脂油（内蒙锡林郭勒草原特产店），脱氧胆酸钠（国药集团化学试剂有限公司，批号F201.104.20），羧甲基纤维素钠（国药集团化学试剂有限公司，批号201.201.10），氢化可的松注射液（天津金耀药业有限公司，批号1.4072.71），大鼠睾酮（T）ELISA试剂盒（南京建成生物工程研究所），大鼠皮质酮（CORT）ELISA试剂盒（南京建成生物工程研究所）。 　　雄性SD大鼠（200±20） g，中国人民解放军南京军区医学动物实验中心，合格证号SCXK（军）201.40002。 　　2方法与结果 　　2.1淫羊藿总黄酮自组装胶束及总黄酮混悬液的制备精密称取脱氧胆酸钠400 mg溶解于10 mL 生理盐水中，置于磁力搅拌器上搅拌至完全溶解，缓慢注入含羊脂油100 mg和淫羊藿总黄酮100 mg的醇溶液，混匀后，旋转蒸发（-01 MPa，4.5 ℃）至无醇味，并用双蒸水定容至10 mL，即得淫羊藿总黄酮自组装胶束[9]。另取淫羊藿总黄酮100 mg，溶于10 mL含05%羧甲基纤维素钠溶液中，配制成含淫羊藿总黄酮10 g?L-1的溶液，待用。 　　2.2大鼠肾阳虚模型的建立与样品采集雄性SD大鼠40只，随机分为空白组、模型组、淫羊藿总黄酮组、总黄酮胶束组，每组10只。模型组、淫羊藿总黄酮组、总黄酮胶束组每天按照10 mg?kg-1的剂量腹腔注射氢化可的松注射液进行造模[10]，空白组注射等量的生理盐水。每天腹腔注射1 h后分别按照100 mg?kg-1的剂量灌胃给予淫羊藿总黄酮和总黄酮胶束溶液，空白组、模型组每天给予等剂量的05%羧甲基纤维素钠溶液，连续1.2 d，记录给药前1 d以及给药后3，6，9，1.2 d大鼠