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基于生物效价双黄连制剂质量控制研究 　　【摘要】目的：研究双黄连制剂体外抗菌效价检测方法，建立基于生物检定的双黄连制剂质量评价模式。 方法：按照中国药典（2010版）规定的生物检定法中的管碟法，以金黄色葡萄球菌为菌种，建立生物效价评价双黄连制剂的方法，并对不同厂家的双黄连口服液的抗菌效价进行测定。结果：双黄连制剂体外抗菌实验量效之间具有良好的线性关系，不同厂家的双黄连口服液抗菌效价为10.278U～15.7276U。结论：生物效价检测方法可以作为双黄连制剂质量控制的一种方法。 　　【关键词】双黄连制剂；质量控制；生物效价；管碟法 　　【中图分类号】R927.11【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）08-0030-03 　　中药制剂质量控制方法目前常用含量测定法，一般以某种或几种有效成分为对照，但中药制剂不同于成分单一的化学药，其成分复杂，具有多成分、多靶点的药理作用，仅依靠某种或几种有效成分难以全面评价中药质量，更难以体现中药的整体效应。借鉴生物制品质量控制模式，建立中药制剂基于生物效价检测的中药质量控制方法，用以完善现行的中药质量控制体系[1]。 　　生物效价测定法是鉴定制剂质量的一种新方法，利用药物对生物体所产生的影响，测定药物的生物效价。用此方法控制中药质量，可以对药品的药效、毒副作用进行评价，尤其对于某些理化方法无法探明含量、无法表征生物活性的中药制剂更有其明显的优越性。目前已有文献采用生物鉴定法对含小檗碱类中药进行研究[2]，以生物效应为为核心药效控制药材的质量，取得了一定进展。迄今为止，尚未见采用生物效价测定法控制成方制剂质量的研究报道。 　　双黄连制剂由金银花、黄芩、连翘组成，具有疏风解表、清热解毒的功效。临床用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛[3]。本文以双黄连相关制剂为例，对处方中三味药材的生物效价进行系统研究，以期控制制剂的质量。为有效进行双黄连制剂的质量控制研究，以多种不同厂家的双黄连制剂为研究对象，以药典规定的双黄连含量测定成分为参考，制定基于生物效价的双黄连制剂质量标准。 　　1仪器与材料 　　1.1仪器1/10万电子天平（Sartorius公司，德国）；高温高压高湿灭菌锅（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；恒温培养箱（北京东联哈尔仪器制造有限公司）；血细胞计数板（上海求精生化试剂仪器有限公司）；牛津杯[内径（6.0±0.1）mm、外径（7.8±0.1）mm、高（10.0±0.1）mm]；游标卡尺（上海宝琴工具有限公司）；陶瓦盖。 　　1.2试剂庆大霉素（批号：130326-201015，标定效价为630U/mg，中国药品生物制品检定所提供）； 金黄色葡萄球菌[staphylocoeccus aureus CMCC（B）26003]（中国药品生物制品检定所）；营养琼脂培养基（蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化钠5g，琼脂15g，北京陆桥技术有限责任公司）；水为无菌超纯水；其余试剂均为分析纯。 　　1.3药品双黄连口服液（批号：112112025，河南太龙药业股份有限公司；批号哈药集团三精制药股份有限公司；批号河南太龙药业股份有限公司；批号东莞市亚洲制药有限公司；批号：121021，河南福森药业有限公司；批号：120905，南阳市新生制药有限公司；批号：110317，哈尔滨汇利药业有限公司；批号：黑龙江珍宝岛药业股份有限公司；批号：110306，黑龙江瑞格制药有限公司；批号：110506哈高科白天鹅药业集团有限公司）。 　　2方法与结果 　　2.1试验材料准备参照中国药典（2010年版）二部“抗生素微生物检定法-管碟法操作”[4]。 　　2.1.1标准品的制备精密称取庆大霉素适量，加pH7.8的磷酸盐溶液稀释0.01μg/ml作为标准品储备液。 　　2.1.2供试品的制备精密量取双黄连口服液样品5ml，至10ml容量瓶中，用无菌水定容至刻度，蒸汽灭菌30min，存于4℃保存备用。 　　2.1.3菌悬液的制备取金黄色葡萄球菌的营养琼脂斜面培养物，另取营养琼脂接种，在37℃下培养20～22h，取3、4代细菌的培养物，用无菌水将菌苔洗下后，制成悬液，使用血球计数板调节浊度为2.0麦氏比浊度，备用。 　　2.1.4双碟的制备[5]于双碟中加入高温灭菌后的营养琼脂培养基20ml，使其在碟内均匀平铺，并在水平操作台上冷却凝固，作为底层。另取培养基适量，高温灭菌后放冷至50℃，加入占培养基体积1%的悬菌液，摇匀，在每一双碟中分别加入5ml，作为菌层。待冷却后，在每一双碟中均匀等距放置6个牛津杯，备用。 　　2.2效价检测的方法学检查 　　2.2.1方法采用管碟法，测定标准品对实验菌