核酸分离纯化与测序PCR技术复习题及答案.docVIP

核酸分离纯化与测序PCR技术复习题及答案 一、填空题 1．SDS 是分离DNA 时常用的一种阴离子除垢剂，它有四个作用： ① 溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂 ； ② 溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来 ； ③ 对RNase、DNase 有一定的抑制作用 ； ④ SDS 能够与蛋白质结合形成R-O-SO3 -…R+-蛋白质复合物，使蛋白质变性沉淀 。 2．酚是蛋白质变性剂，用酚抽提细胞DNA 时，具有两方面的作用：① 是蛋白质变性 ； ② 由于它能使蛋白质变性，故也能使核小体和核糖体解聚，释放出DNA 和RNA, 提高DNA 的得率 。 3．用酚—氯仿抽提DNA 时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇。这是因为，异戊醇 是一种有机溶剂，可以降低表面张力，从而减少气泡产生 。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA 的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 4．同其他水解蛋白酶相比，蛋白水解酶K 具有两个显著的优点：① 水解能力强，作用范围广 ； ② 在SDS 和EDTA 中仍保持高活性，可以同SDS 和EDTA 同时使用 。 5．在分离DNA 时要使用金属离子螯合剂，如EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 螯合Mg2+抑制核酸酶的活性 。 6．用乙醇沉淀DNA 时，通常要在DNA 溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 和NaAc，其目的是 中和DNA 分子的负电荷，增加DNA 分子间的凝聚力 。 7．通常可在三种温度下保存DNA：4~5℃、-20℃、-70℃，其中以 8．引物在基因工程中至少有四个方面的用途：① 合成探针 ；② 合成cDNA ； ③ 用于PCR 反应 ； ④ 进行序列分析 。 9．Clark 发现用Taq DNA 聚合酶得到的PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链 DNA 分子。根据这一发现设计了克隆PCR 产物的 T 载体 。 10．在用SDS 分离DNA 时，要注意SDS 的浓度，0．1％和1％的SDS 的作用效果是不同的，前者 只 将RNA 分离出来 ，后者 可将DNA 和RNA 一同分离出来 。 11．在DNA 分离过程中，通常要进行透析，其目的是 除去小分子的无机离子 。 12．在分离质粒DNA 的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处：① 可以扩增质粒DNA ； ② 抑制菌体数量，有利于裂解 。 13．在DNA 分离过程中造成DNA 分__________子断裂的因素很多，主要有：① 核酸酶降解 ；② 化学降解 ； ③ 物理剪切 。 14．在DNA 保存液中，常加一滴氯仿，主要是起 抑制真菌污染 的作用。 15．按照人们的意愿，改变基因中碱基的组成，以达到 基因突变 的技术称为 定点突变 。 16．在cDNA 的合成中要用到S1 核酸酶，其作用是切除在 第二链合成时形成的发夹环 。 17．在简并引物的设计中，常常要用到dI (次黄嘌呤)，原因是 dI 可以同任何碱基相配 。 18．在分离DNA 时，要戴手套操作，原因是 手上常有核酸酶 。 19．乙醇沉淀DNA 的原理是 乙醇使DNA 分子脱水 。 20．简并引物PCR 主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计 一组混合引物 来合成相应的基因。 21．超离心法纯化质粒DNA 时，选用CsCl 作介质的优点是：① CsCl 与不同DNA 嵌合的能力不同 ； ② CsCl 可以自动形成梯度密度 ，从而使不同分子质量的DNA 分子得以分开。 22．可以用 透析法 除去DNA 溶液中的氯化铯。 二、选择题(单选或多选) 1．从细胞或组织中分离DNA 时，常用蔗糖溶液，目的是 ( B )。 A．抑制核酸酶的活性 B．保护DNA，防止断裂 C．加速蛋白质变性 D．有利于细胞破碎 2．不是所有松弛型质粒都需要进行扩增的，如pBS、pUC 载体系统就不必进行氯霉素扩增，这是因为 这些质粒的拷贝数很高，达到 ( D )。 A．30~50 B．100~200 C．300~400 D．500~700 3．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法 (Maxam-Gilbert) 和酶学序列分析法 (Sanger)。酶学测序法的基本原理／优点是 ( B )。 A．碱基与特殊染料间不同的相互作用 B．一个合成引物的延伸和DNA 合成的可靠终止 C．限制性位点与DNA 末端标记的相关性 D．可同时对DNA 双螺旋的两条链进行测序 E．反应是DNA 特异的，RNA 不会带来干扰，既减少纯化步骤，也节约开支 4．CsCl-EB 密度梯度离心法纯化质粒DNA 的原理是 ( C )。 A．氯化铯可以较多地插入到线状DNA 中 B．氯化铯可以较多地插入到SC DNA 中 C．EB 可以较多地插入到线状DNA 中 D．EB 可以较多地插入到SC DNA