大豆C2H2型锌指蛋白基因STF―2克隆及结构分析.docVIP

大豆C2H2型锌指蛋白基因STF―2克隆及结构分析 　　摘 要：大豆是我国重要的粮油经济作物，是众多行业中必需的原材料。锌指蛋白是一种重要的转录因子，其中双锌指的植物C2H2型锌指蛋白多数与植物的非生物胁迫相关，可以利用生物技术手段提高作物对非生物胁迫的耐受能力。该文利用生物信息学和同源克隆的方法克隆得到了大豆C2H2型锌指蛋白基因STF-2，并且利用软件对其蛋白结构进行了初步分析。 　　关键词：大豆；锌指蛋白；STF-2；结构分析 　　中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）03-04-18-03 　　Cloning and Structural Analysis of STF-2 Encoding a C2H2-type Zinc Finger Protein from Soybean 　　Song Bing1，2 et al. 　　（1Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China；2Jilin City Academy of Agricultural Sciences，Jilin 132101，China） 　　Abstract：Soybean（Glycine max[L.]Merrill）is the important food and oil crops of China which is the important raw materials of many industries.The zinc protein was an important transcription factors，and most plant C2H2-type zinc finger protein with the double zinc-finger structures related with adversity stress.It will offer a favorable condition to enhance the plants tolerance to adversity stress by the biotechnology. In this paper，a C2H2-type zinc finger protein gene STF-2 was isolated from soybean，and analyzed primary structure of the STF-2 by software. 　　Key words：Soybean；Zinc finger protein；STF-2；structural analysis 　　干旱、高盐、低温是限制植物生长发育的不利环境因子[1]。锌指蛋白是转录因子的一种，其对植物的生长发育和非生物胁迫有着重要作用。根据以往的锌指蛋白结构分析结果，可将锌指蛋白分为C4、C2H2、C6、C4HC3等类型，其中大部分类型的锌指蛋白都属于C2H2型[2-3]。科学家们已从拟南芥（Arabidopsis thaliana）、矮牵牛（Petuniahy brida Vilm）以及水稻（Oryzas ativa）等植物中克隆得到了多个与植物非生物胁迫相关的C2H2型锌指蛋白基因。例如，能使转基因烟草明显提高对冷及高盐耐受能力的拟南芥STZ基因[3，4]；能提升耐旱能力的矮牵牛基因ZPT2-3；张红生等克隆得到的水稻锌指蛋白基因RZF71、RZF5，能够提高转基因作物对渗透胁迫的耐受能力[3，5-6]；能提高转基因拟南芥对低温的耐受能力的大豆锌指蛋白基因sCOF-1[7]。相比之下，从拟南芥、水稻、矮牵牛等作物中克隆得到的锌指蛋白基因均有10个左右，而得到功能验证的大豆锌指蛋白基因只有SCOF-1；GmZFP1是黄芳等克隆得到一个新的大豆C2H2型锌指蛋白基因，分析后发现其只有一个锌指结构，推测与大豆的生长发育相关，与非生物胁迫无关[3，8]；白晶等从野生大豆中克隆得到了一个双锌指的C2H2型锌指蛋白基因，但其氨基酸和核酸序列与sCOF-1同源性较高，且没有进行相应的功能验证[9]。本文利用大豆基因组数据库和相关生物信息学软件，采用同源克隆的方法克隆得到了一个新的大豆C2H2型锌指蛋白基因STF-2（GeneBank注册号为：JQ74388），并利用生物信息学软件对其蛋白结构进行了初步分析。 　　1 材料和方法 　　1.1 试验材料与试剂 选用本实验室自有品种“吉农17”的种子，单粒种植于纸杯中，放入的气候箱（15h光照/9h黑暗）中25℃培养10d至4叶期，随后连续7d不予浇水进行模拟干旱胁迫[3]，摘取处理后的大豆叶片，将其放入1.5mL离心管中，再放入液氮