宫炎净提取物中生物碱对子宫内膜炎家兔抗炎作用机理.docVIP

宫炎净提取物中生物碱对子宫内膜炎家兔抗炎作用机理 　　摘要：为研究中药复方宫炎净提取物中生物碱对子宫内膜炎家兔的抗炎作用机理，通过制备子宫内膜炎家兔模型，给予不同剂量的生物碱治疗后采血，分别对血液中超氧化物歧化酶（SOD）活性，丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、前列腺素E2（PGE2）含量，白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达水平进行测定。结果表明，中药复方宫炎净中生物碱能显著增强血清中SOD活性，并显著或极显著降低血清中MDA、NO、IL-2、IL-6及TNF-α含量（P0.05或P0.01）。以上结果表明，生物碱能降低子宫内膜炎家兔脂质过氧化物含量，提高机体的抗氧化能力，降低机体炎性细胞因子含量，降低机体损伤。 　　关键词：生物碱；家兔；子宫内膜炎模型；抗炎机理 　　中图分类号： S853.74文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0209-03 　　收稿日期：2014-03-24 　　基金项目：新疆生产建设兵团科技支疆项目（编号：2013AB010）。 　　作者简介：贾书红（1989―），女，河北石家庄人，硕士研究生，从事中草药的开发与利用研究。E-mail：jiashuhong16@163.com。 　　通信作者：谷新利，男，教授，博士生导师，从事中草药的开发与利用研究。E-mail：xlgu@。奶牛子宫内膜炎是子宫内膜发生炎症的病理过程[1]，在临床上治疗该病大多依赖抗生素，而使用抗生素会带来细菌耐药性、药物残留等问题，迫使人们越来越倾向使用中草药治疗奶牛子宫内膜炎[2-4]。近年来，对于中草药治疗该病的报道较多，且对中草药的抗炎作用也进行了大量研究，但对中草药治疗奶牛子宫内膜炎的机理鲜有报道。研究人员依据中药复方配方原则将益母草、五灵脂、红花、肉桂等中药组合研制开发的中药复方宫炎净用于治疗奶牛子宫内膜炎，并在临床上取得较好的治疗效果[5]。本试验目的是从中药抗氧化以及对细胞因子影响方面观察中药复方宫炎净提取物中生物碱对子宫内膜炎家兔模型血液中一氧化氮（NO）、前列腺素E2（PGE2）、丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）活性以及细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α表达水平变化，旨在初步探讨中药复方宫炎净提取物中生物抗炎作用机理。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1试验药物中药复方宫炎净主要有益母草、当归、川芎、桃仁、五灵脂、甘草等组成，由石河子大学动物科技学院中兽医实验室提供。中药复方宫炎净提取物：取中药复方宫炎净2 kg，加入10倍量70%乙醇浸泡24 h，装柱，以2 mL/s的速度渗漉48 h，收集渗漉液，于旋转蒸发器浓缩至生药含量为1 g/mL。将制备好的宫炎净提取液，用稀盐酸调pH值4～5，抽滤，通过已处理好的阳离子交换树脂柱，至流出液与10%硅钨酸呈阳性反应为止。先用去离子水洗至流出液为近中性，再以5%盐酸溶液洗脱至生物碱反应为阴性。收集洗脱液，蒸干即得生物碱。将生物碱溶于蒸馏水中，配成质量浓度为0.04 g/mL的溶液。 　　1.1.2试验动物健康无生殖疾病的未孕新西兰雌兔，体质量2.0～2.5 kg，由石河子大学试验动物中心提供。家兔子宫内膜炎模型制作[6]： 取30只新西兰雌兔，饲喂1周后，随机分组，其中5只作为正常对照组，其余25只作为试验组，试验组家兔子宫灌注大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的12 h培养物等比例混合菌液2 mL/（只?d），每天1次，连续4 d。通过观察家兔临床症状、体温变化、子宫分泌物变化、白细胞分类变等确认造模成功后用于试验。 　　1.1.3主要试剂与仪器地塞米松磷酸钠注射液（1206091，河南润宏制药有限公司）；冰醋酸为国产分析纯；NO测试盒（硝酸还原酶法、SOD测试盒（羟胺法、MDA测试盒（硫代巴比妥酸法均购于南京建成生物工程研究所；IL-2、IL-6、PGE2与TNF-a ELISA测定试剂盒均购于美国RD公司。 BioTek SynergeyTM 2多功能酶标仪 （550，Bio-Rad）；TDL-5离心机（Z36 HK，上海安亭科学仪器厂）；电热恒温水浴箱（WB-3-2.0T，上海实贝仪器设备厂）；涡旋混匀器。 　　1.2方法 　　将25只造模成功的新西兰母兔随机分成5组，每组5只，分别为中药高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组和地塞米松组。中药高中低3个剂量组分别给予生物碱（10、5、2.5 mL/只）；地塞米松组给予地塞米松，剂量为 5 mg/kg；模型组不予治疗；正常对照组给予生理盐水。给予频率1次/d，连续7 d。 　　样品采集和处理。各组家兔于末次给药后，分别心脏采血约1