家兔动脉粥样硬化球囊损伤模型制备过程与分析.docVIP

家兔动脉粥样硬化球囊损伤模型制备过程与分析 　　 　　摘要:目的 寻求制备动脉粥样硬化球囊损伤动物模型的理想方法。 方法 根据实际工作中积累的经验，对常规造模方法进行优化设计，观察其造模效果，并加以分析。结果 对20只家兔实施造模，成功15只，效果良好，能够满足研究需要。结论 笔者所使用的造模方法依据充分、切实可行、值得推广，可供其他研究人员借鉴。 　　关键词：动脉粥样硬化球囊损伤；动物模型；家兔；制备过程；分析 　　中图分类号：R541.4 R285.5 文献标识码：A doi:10.3969/j.issn.1672 1349.2014.05.040 文章编号：1672 1349（2014）05 0593 02 　　 　　 动脉粥样硬化（AS）主要累及大中型动脉，表现为内膜增厚，出现泡沫细胞，形成动脉粥样斑块。斑块突入动脉管腔造成血管狭窄，斑块破裂继发动脉粥样血栓形成，引发严重临床事件［1］。1904年Felix Marchand将之命名为“atherosclerosis”以来，动脉粥样硬化病变发生的原因及发病机制一直是医学领域的重要研究课题。动脉粥样硬化研究过程需要寻求一种快速、优化的方法建立AS动物模型,笔者所采用的造模方法是在综合其他AS造模方法的基础上，进行优化设计，缩短造模周期，使模型能够快速成功建立，为今后研究AS提供一定的参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 新西兰大耳白兔20只，全部雄性，体质量2．0 kg～2．5 kg，3月龄，由东创实验动物中心提供(合格证号：医动检，普通饲料由湖南中医药大学实验动物中心提供。每只单笼饲养，饲养温度25℃～26℃，湿度50%～70%，普通饲料饲养3周，经观察确认兔状态良好，无食欲低下、腹泻、萎靡等症。 　　1.2 手术准备 　　1.2.1 兔AS球囊损伤造模包 由弯圆组织剪1柄、中弯止血钳5柄、无齿镊4柄，弯眼科剪1柄、持针器1柄、线剪1柄、小圆弯针2枚、动脉夹1枚、洞巾1条、零号医用缝合线若干、纱布块若干、整齐放置于弯盘中，用双层布巾包裹固定妥善，高压蒸汽消毒备用。 　　1.2.2 普通球囊导管和附件 球囊(3．0～3．5)mm×15 mm(Coridis公司)，4F桡动脉鞘管和21 G桡动脉穿刺针(Coridis公司)，0．014 mm×195 cm ATW PTCA引导钢丝(Coridis公司)球囊扩张压力泵(Coridis公司)。 　　1.2.3 兔固定操作台 20%乌拉坦250 mL;普通肝素100 U/kg；普通剪刀；碘伏；棉球若干；10 mL注射器若干；无菌手套若干、口罩帽子若干。 　　1.3 操作流程 称重后经兔耳缘静脉注射20%的乌拉坦4 ml/kg，作全身麻醉，麻醉后再经耳缘注射普通肝素100 U/kg；仰位固定在兔台上，剪去右股动脉体毛，在右侧股动脉搏动明显处周围剃毛约直径5 cm，该处皮肤碘伏消毒，铺无菌洞巾； 在无菌条件下，沿股动脉走行方向切开皮肤。分离皮下组织及肌肉，钝性分离右股动脉。直视下以21G桡动脉穿刺针行股动脉穿刺术。穿刺成功后，借助于导丝插入4F桡动脉鞘管。在经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)导丝引导下插入球囊导管，使球囊位于腹主动脉上段。维持压力泵压力6～8个大气压，并缓慢回拉球囊导管，回拉有阻力时表明球囊直径与血管吻合，如球囊较小，则换用大0．5 mm的球囊(3．0～3．5 mm)，压力泵压力归零，重复操作3次，损伤腹主动脉内膜。退出球囊及导丝，拔出鞘管，压迫血管10 min后，并用明胶海绵包扎血管，缝合手术切口。伤口处洒入庆大霉素8万单位防止感染，术后继续以肌内注射青霉素抗感染。 　　2 结 果 　　按上述流程共对20只家兔进行造模操作，其中存活15只，经10周高脂喂养后，进行提取血液和病理标本，病理研究表明，所诱导产生的斑块与人类斑块，成分有一定相似性，包括斑块纤维帽、钙化、脂核等。病理结果说明早期斑块主要为泡沫细胞，而纤维斑块期脂核形成后，其中心主要成分为胆固醇和含固体结晶或液晶态的胆固醇酯；造模失败5只，分别为：2只在麻醉时突然死亡，考虑麻醉药物推注过快所致；2只在术后3 d内死亡，考虑手术出血过多所致；1只在术后10 d死亡，死亡原因不明。整体造模成功率为75%，能够保证实验研究的顺利开展。 　　3 讨 论 　　制备AS兔球囊损伤模型涉及的环节非常多，要求实验人员有一定的动手能力，需要娴熟而轻柔的操作及实验人员之间的默契配合。现将造模过程中的一些细节问题分析如下： 　　3.1 动物选择 目前AS模型所用的动物有鼠、兔、猪、狗、猴，较理想的动物模型最常用兔、猪、鼠。隔药饼灸作用于人体，腧穴靶向准确，而鼠体型过小，同样的隔药饼操作成为一种操作范围过大、损伤效应多