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TRIM3基因在原发性肝癌中表达及功能的初步研究-流行病与卫生统计学专业论文
广东药学院学位论文原创性 声明
本人郑重声明 : 本人所呈交的学位论文 ,系我个人在导师的指导下 进行研究工作所取得的成果 。除文中己特别加以标注和致谢的地方外, 不包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果 。对本研究做出贡 献的其它个人和集体,均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本 声明的法律结果完全由本人承担。
学位论文作者签名 : 一豆豆
日期: μI年 5 月 ),? 日
.,
学位论文使用授权的 声明
本人完全了解广东药学院有关保留和使用学位论文的规定,学校有 权保留和向有关部 门或机构送交本论文的复印件和电子版,允许论文被 查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库
,可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。
保密论文主解密后适用本声明。
v ,(、记
论文作者签名: 机 论文导师签名 :你如飞 ,
日期:}OJ S年 5 月邓 日 ·
目 录
中文摘要 1
Abstract 3
1 前 言 1
1.1 肝癌的研究进展 1
1.2 TRIM 家族研究进展 2
1.3 TRIM3 基因与肿瘤关系研究进展 3
2 材料与方法 4
2.1 实验材料 4
2.1.1 标本采集 4
2.1.2 克隆载体 5
2.1.3 主要仪器设备与化学试剂 5
2.1.4 常用的缓冲液、培养基等溶液的试剂配方 7
2.2 实验方法 8
2.2.1 实时荧光定量 RT-PCR 检测 TRIM3 基因表达 8
2.2.2 免疫印迹法对 TRIM3 蛋白表达的检测 10
2.2.3 免疫组织化学染色检测肝癌石蜡切片中 TRIM3 蛋白的表达 12
2.2.4 重组慢病毒载体构建、病毒包装与滴度检测 14
2.2.5 重组慢病毒转导肝癌细胞与表达检测 14
2.2.6 过表达 TRIM3 对肝癌细胞生物学行为的影响 15
2.2.7 统计分析 17
3 结 果 18
HYPERLINK \l _TOC_250004 3.1 实时荧光定量 RT-PCR 检测 TRIM3 基因表达 18
3.1.1 TRIM3 基因 mRNA 在肝癌及癌旁组织中的差异表达 18
3.1.2 TRIM3 基因 mRNA 在肝癌细胞系中的差异表达 19
HYPERLINK \l _TOC_250003 3.2 TRIM3 蛋白在肝癌组织和肝相关细胞系中的表达结果 20
3.2.1 Western Blot 检测 TRIM3 蛋白在肝癌组织及相应的正常肝组织中的差异表达 . 20
3.2.2 TRIM3 蛋白在肝癌细胞系中的差异表达 21
HYPERLINK \l _TOC_250002 3.3 石蜡包埋肝癌组织切片中 TRIM3 的表达检测结果 23
3.3.1 TRIM3 蛋白在肝癌中表达情况 23
3.3.2 TRIM3 蛋白表达与肝癌临床参数之间的关系 24
3.3.3 TRIM3 在肝癌中的表达与预后的相关分析 26
HYPERLINK \l _TOC_250001 3.4.重组慢病毒感染肝癌细胞 TRIM3 表达检测 27
3.4.1 慢病毒感染后肝癌细胞中 TRIM3 的 mRNA 表达 27
3.4.2 慢病毒感染后肝癌细胞中 TRIM3 蛋白的表达 29
HYPERLINK \l _TOC_250000 3.5 TRIM3 对肝癌细胞生物学行为的影响 30
3.5.1 过表达 TRIM3 抑制肿瘤细胞生长 30
3.5.2 过表达 TRIM3 降低肿瘤细胞克隆形成能力 32
3.5.3 过表达 TRIM3 对肿瘤细胞周期有阻滞作用 32
3.5.4 过表达 TRIM3 诱导肿瘤细胞凋亡 32
3.5.5 过表达 TRIM3 抑制肝癌细胞的体外迁移能力 36
3.5.6 过表达 TRIM3 抑制肝癌细胞的体外侵袭能力 36
4 讨 论 39
5 总 结 42
参考文献 43
综 述 48
硕士期间发表的论文 56
附录 常用缩略词表 57
致 谢 58
PAGE
PAGE 1
TRIM3基因在原发性肝癌中表达及功能的初步研究
硕士研究生:晁洁(流行病与卫生统计学) 导 师:张建华 教授
中文摘要
研究背景及目的
肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种全球常见的恶性肿瘤,在所有实体 肿瘤中发病率居第五位,肿瘤相关死亡率居于第四位。我国为原发性肝癌的高发区, 近几年呈现发病率上升的趋势。尽管目前肝癌的治疗手段有了很大程度的进步,但是 肝癌预后并不理想,五年生存率只有 25%-39%。导致肝癌预后差的主要原因是恶性程 度高、血管侵犯及肝内转移。肝癌的发病过程是多种因素共同作用的结果
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