TCF3对非小细胞肺癌A549细胞株生长和迁移的影响-内科学(呼吸内科)专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 NSCLC 英文全称 Non-small cell lung cancer 中文全称 非小细胞肺癌 TCF LEF1 T cell factor Lymphoid Enhancing Factor T 细胞因子 淋巴增强因子 HBE Human bronchial epithelial cell 人支气管上皮细胞 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 PCP Planar cell polarity 平面细胞极性 PKA AXIN Protein kinase A Axis inhibition protein 蛋白激酶 A 轴蛋白 APC Adenomatous polyposis coli 结肠腺瘤样息肉病蛋白 GSK-3β FZD Glycogen synthase kinase-3β Frizzled 糖原合成酶激酶-3β 卷曲蛋白 Dvl Dishevelled 蓬乱蛋白 SULF Sulfatase 硫化酯酶 EGFR Epidermal growth factor receptor 表皮生长因子 SFRP Secreted frizzled-related protein 分泌型卷曲相关蛋白 WIF Wnt inhibitory factor Wnt 抑制因子 1 TCF3 对非小细胞肺癌 A549 细胞株生长和迁移的影响 摘要 目的：探讨 TCF3（T cell factor 3）基因敲低对 A549 细胞的 Wnt 通 路转录活性，细胞生长和迁移的影响。 方法：通过转染 SiRNA 将 A549 细胞中的 TCF3 基因敲低作为实验 组，同时设立仅常规培养的空白对照组和转染阴性 SiRNA 的阴性对照 组。通过实时荧光定量 PCR 及 Western blot 明确 3 组细胞中 TCF3 的 mRNA 和蛋白表达量，通过 TOPFlash/FOPFlash 信号通路报告载体测 定细胞 Wnt 通路转录活性，CCK-8 检测 A549 细胞生长活力，流式细 胞学技术分析 A549 细胞周期与细胞调亡情况，Transwell 测定 A549 细 胞迁移能力。 结果：与空白对照组和阴性对照组比较，实验组 A549 细胞 TCF3 的 mRNA（0.17±0.02 VS 1.00±0.00，P=0.00；0.17±0.02 VS 1.00±0.17， P=0.00）和蛋白水平（0.03±0.01 VS 0.15±0.02，P=0.00；0.03±0.01 VS 0.15±0.02，P=0.00）显著降低；TOPflash/FOPflash 报告基因的比值降 低（5.20±0.60 VS 10.30±0.90，P=0.00；5.20±0.60 VS 10.70±0.40， P=0.00 ） ;Wnt 靶 基 因 C-myc 的 蛋 白 表 达 量 下 降 （ 0.27±0.02 VS 0.75±0.04，P=0.00；0.27±0.02 VS 0.74±0.04，P=0.00）；细胞的增殖活 性降低，细胞凋亡率增加（29.77±1.52 VS 14.59±1.99，P=0.00；29.77±1.52 VS 15.33±1.97，P=0.00），细胞周期比例发生变化，G0/G1 期细胞增 2 多（71.98±0.51 VS 59.20±2.55，P=0.01；71.98±0.51 VS 58.06±3.25， P=0.00），S 期细胞减少（23.91±0.05 VS 30.87±1.80，P=0.00；23.91±0.05 VS 32.87±3.90，P=0.01）；细胞穿膜数目明显减少（36.00±4.00 VS 68.70±4.20，P=0.00；36.00±4.00 VS 67.00±8.70，P=0.00）。 结论：1、敲低 TCF3 基因能引起 A549 细胞的 Wnt 通路转录活性明 显降低， 并使 Wnt 下游靶基因 C-myc 的表达下调，提示 TCF3 在非小 细胞肺癌的 Wnt 通路中起转录激活的作用。2、TCF3 可能通过调控 Wnt 通路下游靶基因而影响肺癌细胞的生长及迁移能力。 关键词：T 细胞因子 3,A549,细胞生长,细胞迁移 3 EFFECTS OF TCF3 ON CELL PROLIFERATION AND MIGRATION IN NON-SMALL CELL CANCER A549 CELLS ABSTRACT Objective ：To investigate the effect of T cell factor 3（TCF3） gene silenc