TCF21对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用-妇产科学专业论文.docxVIP

中 中 文 摘 要 PAGE 1万方数据 PAGE 1 万方数据 TCF21 对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用 摘 要 卵巢癌的致死率居妇科恶性肿瘤的首位。卵巢癌起病隐匿，70%发现 时已为晚期，晚期卵巢癌的生存率不到 30%，而早期发现的卵巢癌经过手 术和化疗，大部分可以达到治愈或完全缓解，其 5 年生存率可达 90%。据 美国卵巢癌治疗研究报道，卵巢癌在美国女性恶性肿瘤的死亡原因中位于 第五。因此早诊断、早治疗对于提高卵巢癌患者的生存率非常重要。诊治 卵巢癌的一大难点是其早期缺乏特异的临床表现和灵敏的筛查方法，因此 研究卵巢癌发生发展的分子机制，为早期诊治卵巢癌寻找新的靶点是非常 必要的。 近来研究表明，TCF21 是一种抑癌基因，在头颈癌、肺癌、乳腺癌、 结肠癌、胃癌和黑色素瘤等多种肿瘤中呈低表达状态。关于 TCF21 在肿 瘤中的作用机制有两个方面：一是启动子甲基化导致其表达下调，从而导 致肿瘤的发生发展，这种下调机制已得到了较多研究的证实；另一方面是 Zhang 等人在肾癌中发现 miR-21 通过下调 TCF21，从而抑制 Kiss-1 基因 的表达，增加肾癌的侵袭能力，表明 TCF21 上游调控基因可能是 miR-21， 其下游调控基因可能是 Kiss-1 基因。在恶性黑色素瘤、肾癌和结直肠癌 均发现 TCF21 的下游调控基因可能是 Kiss-1 基因，那么在 TCF21 下游， 是否只调控 Kiss-1 使其表达增高，从而抑制肿瘤的转移？在肿瘤的增殖 和凋亡方面是否同样存在 TCF21 的下游调控基因？有待进一步证实。 研究发现恶性黑色素瘤、肺癌、头颈癌、乳腺和卵巢癌的发生可能与 6 号染色体区域 6q22 和 6q23-q24 的杂合型缺失相关，而 TCF21 基因就位 于 6 号染色体区域 6q23-q24，且已有研究报道 TCF21 在恶性黑色素瘤、 肺癌、头颈癌、乳腺呈低表达状态，但对于 TCF21 在卵巢癌的表达情况 及作用机制目前尚无文献报道。 目的：本研究探讨 TCF21 对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用及其可能 的作用调控机制。 方法： 1 分别采用荧光实时定量 PCR 和 Western-blot 方法检测卵巢癌组织和 正常卵巢组织的 TCF21mRNA 和蛋白水平。 2 利用 Gateway 克隆技术把目的基因 TCF21 克隆到目的载体上，并 对目的载体进行琼脂糖凝胶电泳和 DNA 序列检测检测。 3 利用慢病毒转染技术在卵巢癌 Ovcar8 细胞中高表达 TCF21 基因， 并用抗生素对转染后的细胞进行筛选。 4 将细胞分为空白对照组（Ovcar8）和实验组（Ovcar8-TCF21），以 荧光实时定量 PCR 和 Western-blot 方法检验 TCF21 基因在实验组第 1、3、 5 代和空白对照组的表达水平。 5 采用 MTT 法检测 TCF21 高表达对 Ovcar8 增殖的影响。 6 采用流式细胞术检测 TCF21 高表达对 Ovcar8 凋亡的影响。 7 运用荧光实时定量 PCR 检测 CyclinA、B、C、D 和 CKD2、3、4、 6 在实验组和空白对照组的表达水平。 结果：1 卵巢癌组织中的 TCF21 的表达：荧光实时定量 PCR 和 Western-blot 均显示，卵巢癌组织中的 TCF21mRNA 和蛋白表达水平较正 常卵巢组织低；2 目的载体检测：电泳条带显示两条带，DNA 序列检测 显示目的载体的序列与 TCF21 基因的 69-1028bp 重合；3 转染效果的观察： 利用抗生素筛选，空白对照组细胞全部死亡，实验组细胞 90％存活；4 目的基因的表达：荧光实时定量 PCR 和 Western-blot 检测均显示实验组的 第 1、3、5 代细胞组较空白对照组 TCF21mRNA 和蛋白表达水平明显上 升；5 MTT 法检测 TCF21 高表达对 Ovcar8 增殖能力的影响：结果显示实 验组与空白对照组比较在 24h 的 OD 值无统计学差异（P＞0.05），在 48h、 72h、96h 的 OD 值降低，且有统计学差异（P0.05）；6 流式细胞术检测 TCF21 高表达对 Ovcar8 凋亡的影响：结果显示实验组较空白对照组细胞 凋亡率明显上升，有统计学差异（P0.05）；7 CyclinA、B、C、D 和 CKD2、 3、4、6 在实验组和空白对照组的表达水平：荧光实时定量 PCR 检测显 示，实验组与空白对照组比较，CyclinC 和 CKD2 表达水平明显降低，有 统计学差异（P0.05），其余基因表达无统计学差异。 结论： 1 卵巢癌组织中的 TCF21 基因的表达下降。 2 高表达 TCF21 后 Ovcar8 的细