SOS1对高转移潜能卵巢癌Hey细胞恶性生物学行为的影响及机制探究-妇产科学专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 AP 英文全称 Ammonium Persulfate 中文全称 过硫酸胺 BCA DAB bicinchoninic acid Diaminobenzidine 2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠 二氨基联苯胺 DMSO Dimethyl Sulfoxide 二甲基亚砜 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 GDP Guanosine diphosphate 二磷酸鸟苷 GEFs Guanine-nucleotide exchange factors 鸟核苷酸因子交换因子 GTP guanosine triphosphate 三磷酸鸟苷 MMPs matrix metalloproteinases 基质金属蛋白酶 MTT Methyl thiazolyl tetrazolium 四甲基偶氮唑盐 mRNA message Ribonucleic Acid 信使核糖核酸 GST Glutathione S-transferase 谷胱甘肽巯基转移酶 MAPK mitogen-activated protein kinase 促分裂素原活化蛋白激酶 PBS phosphate bufered salin 磷酸盐缓冲液 PMSF phenylmethyl sulfonylfluorid 苯甲基磺酰氟 PI Propidium Iodide 碘化丙啶 PVDF Polyvinylidene Fluoride membrane 二氟化树脂 PAGE polyacrylmide gelelectrophores 聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 siRNA TBST small interfering RNA tris buffered saline with tween 20 小干扰 RNA 吐温 20-Tris 盐缓冲液 TEMED Tris NNNN-Tetramethylethylenediamine Tris hydroxymethyl amino methane N，NN’N’一四甲基二乙胺 三羟甲基氨基甲烷 rpm rolls per minute 每分钟转数 1 SOS1 对卵巢癌 Hey 细胞恶性生物学行为的影响及 机制探究 摘 要 目的：探讨 SOS1 对高转移潜能卵巢癌 Hey 细胞恶性生物学行为 的影响及机制。 方法：1.体外实验：免疫荧光检测 SOS1 表达缺失的 Hey 细胞 （ Hey-SOS1i ）、 转染阴性对照细胞 （ Hey-NT ） 及 空 白 对 照 细胞 （Hey-WT）三组细胞形态、骨架蛋白、细胞伪足及细胞间排列情况； Transwell 实验检测细胞迁移、侵袭能力；粘附实验检测细胞与基质间 粘附；内渗及外渗实验反应侵袭能力; MTT 和平板克隆检测细胞生长， 同时检测细胞周期和凋亡。2.体内实验：构建裸鼠皮下移植瘤模型及腹 腔种植转移模型，体内验证生长及转移情况。3.机制探究：1 定量 PCR 检测 E 钙黏蛋白、N 钙黏蛋白、波形蛋白、MMP9、MMP2、snail、twist、 Slug 的 RNA 表达；2.Western Blot 检测上述蛋白及调控 EMT 的信号通 路中关键蛋白表达；3.免疫荧光检测 snail 的细胞核定位。 结果：1.与 Hey-NT、Hey-WT 细胞相比，Hey-SOS1i 细胞失去极 性，骨架蛋白稀疏、排列较紊乱，细胞突出的伪足减少而细胞之间排 列紧密；迁移(90.00±2.45 vs.274.67±8.18 vs.254.00±2.16, P0.01)、侵袭 细胞数减少（24.00±1.25 vs.112.33±2.54 vs.102.00±8.94, P0.01）；细胞 2 基质粘附能力下降（0.31±0.10 vs.0.72±0.10 vs.0.69±0.13，P0.05）；血 管内渗细胞数（13.00±1.63 vs.27.33±1.24 vs.24.00±2.16，P0.05）及外 渗细胞数（9.00±2.16 vs.27.22±1.69 vs.32.33±1.05，P0.05）显著减少, 细胞增殖能力及克隆形成率下降（013±0.10 vs.0.36±0.02 vs.0.41±0.06， P0.05）；细胞增殖指数下降（0.36±0.01 vs.0.49±0.01vs.0.51±0.05 ， P0.05 ）； 总 的 凋 亡 细 胞 数 较 少 ， 凋 亡 细 胞 比 例 （3.52%±0.05%vs.5.64%±2.37% vs.3.11%±0.55%，P0.05），