Y盒结合蛋白-1C末端结构域调节血管新生的机制研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

lii l i i 明士尸他 明 士尸 他 MM 学 大 blu l 、归 xd 文 论 位 川(子 研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位或证书所使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示了致谢。 作者签名: 主动3 日期:主 年_6_?J ?日 学位论文使用授权声明 本人完全了解河 北大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布 论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 本学位论文属于 1、保密口，在 年一一一月一_B 解，密后适用本授权声明。 2 、不保密d。 〈请在以上相应方格内打.;，， ) 保护知识产权声明 本人为申请河北大学学位所提交的题目为谧销的斗 C检品(í构钱调子衅科协州而先 的学位论文，是我个人在导师(陈休干〉指导并 与导师合作下取得的研 究成果， 研究 工作及取得的研究成果是在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助下完成 的。本人完全了解并严格遵守中华人民共和国为保护知识产权所制定的各项法律、行政 法规以及河北大学的相关规定。 本人声明如下:本论文的成果归河北大学所有，未经征得指导教师和河北大学的书 面同意和授权，本人保证不以任何形式公开和传播科研成果和科研工作内容。如果违反 本声明，本人愿意承担相应法律责任。 声明人: 主功3 日期:沮三一年_b JJ-+-a 作者签名: iL你 导师签名: 叫f? ，)) 日期 山头日 摘 摘 要 摘 要 目的 近年来，乳腺癌的发病率呈上升趋势，发病率居于女性恶性肿瘤的首位，对世界 女性健康造成严重威胁。血管新生过程是肿瘤的增殖、侵袭、转移的关键环节，抗血管 新生治疗也广泛应用于临床，抗血管生成药物日新月异。Y 盒结合蛋-1（Y-box binding protein-1，YB-1）作为体内重要的转录因子，在包括基因转录、RNA 剪切及 mRNA 翻 译、DNA 修复、细胞增殖等多个过程中均发挥重要作用，并在肺癌、结肠癌、胃癌等 多种恶性肿瘤中表达，并与肿瘤增殖、耐药密切相关，且有研究表明其可调节血管内皮 细胞的增殖，但其调节肿瘤血管新生的机制有待进一步研究。本研究通过构建腺病毒表 达载体，并用腺病毒液感染 EA.hy926 内皮细胞旨在探究冷休克蛋白家族成员 YB-1 蛋 白 C 末端结构域（YB-1 C-terminal domain，YB-1 CTD）对血管新生的调节机制，为抗 血管新生靶向治疗提供理论依据。 方法 构建腺病毒表达载体，用 GFP 和 GFP-YB-1 CTD 腺病毒液感染 EA.hy926 内皮细 胞，MTS 法检测 GFP 和 GFP-YB-1 CTD 对细胞增殖的影响；流式细胞术 PI 染色检测 YB-1 CTD 对细胞周期的影响；Western blot 检测 YB-1 CTD 对 EA.hy926 细胞周期相关 蛋白 p21 、cyclin B1 的表达水平的调节；RT-PCR 检测 YB-1 CTD 对 p21 、cyclin B1 mRNA 表达的影响；跨膜迁移实验评价 YB-1 CTD 对 EA.hy926 内皮细胞迁移能力的影 响；血管内皮成环实验检测 YB-1 CTD 对 EA.hy926 内皮细胞血管成环特性的影响； ELISA 检测 YB-1CTD 对 SK-BR-3 乳腺癌细胞分泌 VEGF 的调节；检测细胞骨架染色观 察 YB-1CTD 对 EA.hy926 内皮细胞细胞骨架的分布及状态的影响。所有数据以均数±标 准差（ x ± s）表示，应用 SPSS16.0 统计软件进行处理，均数比较采用 t 检验或单因素方 差分析（One-way ANOVA），以 P＜0.05 为差异有统计学意义。 结果 MTS 法检测细胞增殖显示，转染 GFP-YB-1 CTD 48 小时后，EA.hy926 内皮细胞 和 SK-BR-3 乳腺癌细胞增殖均受到抑制；流式细胞术 PI 染色检测细胞周期结果提示 YB-1 CTD 可调节 EA.hy926 细胞周期阻滞在 G1 期；Western blot 免疫印迹分析显示与 GFP 对照组相比，GFP-YB-1 CTD 能上调 EA.hy926 内皮细胞中 p21 蛋白的表达水平， 并下调 cyclin B1 蛋白的表达水平；实时定量 PCR 结果提示，在 mRNA 水平，YB-1CTD 促进 p21 的表达，而抑制 cyclin B1 的表达；跨膜迁移实验