γ 氨基丁酸影响皮层扩散性抑制的活体研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

汕头大学硕士学位论 汕头大学硕士学位论文 I I 摘 要 皮层扩散性抑制（CSD）是神经元和胶质细胞强烈去极化而产生的可向邻近区传播的 去极化波。CSD 与许多神经性性疾病有密切联系，如偏头痛、中风、癫痫等。γ-氨基丁 酸（GABA）是一种天然存在的非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制 性神经递质，许多研究表明，GABA 系统中每一分子组成都是新型治疗的潜在靶目标。本 文主要探讨了 GABA 对 CSD 发生过程中场电位、细胞外空间变化的影响，以及诱发 CSD 后，检测了 GABA 合成酶（GAD65 和 GAD67）基因及蛋白的表达。场电位的结果显示 GABAA 受体抑制剂戊四唑（PTZ）能延长 CSD 的持续时间，但并不改变场电位的下降尺 度。GABA 能明显降低场电位下降的幅度。细胞外空间测量结果表明，PTZ 并不影响细胞 肿胀的持续时间，对细胞外空间参数α和λ也没有影响。GABA 能减少细胞肿胀的持续时 间，还能减弱细胞外空间参数α和λ在 CSD 发生期间变化的幅度。Real-time PCR 结果表 明，GAD65 和 GAD67 在 CSD 诱发半脑中的表达比对侧半脑中和正常脑中含量要高， GAD65RNA 含量升高显著。Western blot 结果表明 GAD65 和 GAD67 在 CSD 诱发半脑中 的表达比对侧半脑中和正常脑组织中表达量都要高。免疫组化结果发现 GAD65 和 GAD67 在神经元中表达，星型胶质细胞中不表达。各项结果表明，GABA 减弱 CSD 引起的场电 位下降和细胞外空间变化的幅度，CSD 能上调 GAD65 和 GAD67 的表达，提示 GAD 增加 有可能是机体本身对 CSD 的自我保护反应，GABA 受体可作为基于 CSD 机理的神经性疾 病的治疗靶向。 关键词: 皮层扩散性抑制；γ-氨基丁酸；谷氨酸脱羧酶 65；谷氨酸脱羧酶 67；戊四唑 II II Abstract Cortical spreading depression (CSD), a self-propagating depolarization wave of neuronal and glia, is implicated in many neurological disorders such as migraine, stroke, and epilepsy. GABA is the major inhibitory neurotransmitter in the central nervous system. Many components in the pathway of inhibitory synaptic transmission have been reported as potential therapeutic targets in treating neurological disorders. In this study, we studied the effect of GABA on the field potential and extracellular space diffusion parameters during acute CSD, and the mRNA and protein expressions for GAD65 and GAD67 following CSD. CSD was induced in vivo by concentrated potassium chloride. Application of GABAA receptor inhibitor pentylenetetrazol (PTZ) did not alter the amplitudes of the CSD-induced DC potential shifts but prolonged the CSD duration. Increased extracellular GABA content could reduce the extent of DC potential shifts during CSD. Exogenous GABA minimized the dynamic changes of the extracellular diffusion parameters ???extracellular volume fraction??and ??(diffusion tortuosity) during CSD, but PTZ didn’t. Expressions of GAD65 and GAD67 were upregulated follo