γ-synuclein在前列腺癌恶性进展中的作用及机制研究-外科学(泌尿外科)专业论文.docxVIP

γ-synuclein γ-synuclein 在前列腺癌恶性进展中的作用及机制研究 第二军医大学博士学位论文 第二军医大学博士学位论文 - - PAGE 11 - - - PAGE 10 - 摘 要 【背景】 前列腺癌（Prostate cancer，PCa）是老年男性最常见的恶性肿瘤之一，2010 年， 美国查出男性 789620 新发癌症病例，前列腺癌占首位（28％）；死亡病例男性 299200 例，前列腺癌占 11％，位居第二位。在亚洲国家，近年来随着生活水平的提高及人 均寿命的延长, 前列腺癌发病率也呈现明显上升趋势。前列腺癌已成为世界性的公共 健康问题。前列腺特异性抗原（prostate specific antigen PSA）是目前前列腺癌早期诊 断的金标准，但敏感性和特异性已显示出局限性。以血清 PSA＜4ng/ml 为参考值， 临床上约有 25％患者漏诊；而目前作为临床诊断灰区值的 4～10ng/ml 病例中，也只 有约 30％诊断为 PCa。临床上 80％的 PCa 患者表现为隐匿型，他们可以带瘤生存， 一直没有进展，直至死于其它疾病，因此这些患者只要严密观察即可，无需特殊处理。 而只有约 20％PCa 患者为临床进展性 PCa，其侵袭性强，且很快进入 PCa 晚期阶段。 据统计，约有 80％接受治疗的 PCa 病人本无需接受治疗，导致过度治疗，这不仅造 成医疗资源的浪费，而且给病人带来了痛苦和生活质量的下降。因此，迫切需要寻找 特异性更强、敏感性更高，能鉴别、预测侵袭性 PCa 的标志物。 神经突触核蛋白(synucleins)是一个广泛分布于中枢神经系统突触前成分内的小 分子可溶性蛋白质家族，由 α-Synuclein、β-Synuclein 和 γ-Synuclein 3 个成员组成。 他们是一组氨基酸序列及结构高度同源的天然伸展蛋白。目前，对于他们的生物学功 能还未充分了解。已有研究显示他们与神经系统的发育及某些神经变性疾病相关。近 来研究发现 γ-Synuclein（SNCG）在多种肿瘤特别是晚期肿瘤中异常高表达，她能促 使肿瘤细胞跨过有丝分裂检测点而非整倍体增殖；在体外实验和动物体内实验中增加 肿瘤细胞的侵袭和转移能力；以及干扰化疗药物引导的细胞凋亡等等。肿瘤的进程中， SNCG 的分布逐渐丧失组织特异性，目前，在多种肿瘤包括乳腺癌、卵巢癌、肝癌、 肺癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌等肿瘤逐渐受到关注，使得 SNCG 作为新的肿瘤标志物和治疗的靶点成为可能。 【目的】 探讨 SNCG 在前列腺癌发生、恶性进展中的作用及机制，为 SNCG 成为前列腺 癌恶性进展标志物和治疗靶点奠定理论基础。 【方法】 1、 免疫组化检测 10 例正常前列腺组织，10 例前列腺炎组织，10 例前列腺增生组 织，10 例高级别前列腺上皮内瘤（HGPIN），122 例原发前列腺癌组织和 5 例激 素非依赖性前列腺癌组织标本中 SNCG 蛋白表达。 2、 RT-PCR、Western blot 检测激素依赖性前列腺癌细胞系 LNCaP 和激素非依赖性 前列腺癌细胞 LNCaP-AI、PC3、DU145 中 SNCG 表达。 3、 构建 SNCG 质粒和对照质粒，转染 LNCaP-AI 并筛选高表达外源性 SNCG 的稳 定细胞株；选择抑制效率高的 siRNA，构建 pLenO-siSNCG-166 和对照表达载体， 转染 LNCaP 细胞，筛选抑制内源性 SNCG 表达的稳定细胞株。 4、 Transwell 小室模型实验分别检测调节 SNCG 表达对前列腺癌 LNCaP 细胞迁移 和侵袭能力的影响。 5、 CCK-8 细胞增殖实验检测 SNCG 表达变化对 LNCaP 细胞体外增殖能力影响。 6、 流式细胞仪检测分析 SNCG 对 LNCaP 细胞周期的影响。 7、 建立裸鼠皮下移植瘤动物模型，分析 SNCG 改变对 LNCaP 细胞体内成瘤能力影 响。 8、 RT-PCR 检测雄激素变化对 LNCaP 细胞 SNCG 表达的影响。 9、 免疫共沉淀验证 SNCG 蛋白和雄激素受体（AR）蛋白相互作用。 10、 RT-PCR 检测调节 SNCG 表达对 AR、前列腺特异性抗原（PSA）表达的影响。 11、 双荧光素酶报告基因检测 SNCG 对 AR 转录活性的作用。 【结果】 1、 SNCG 在正常前列腺组织、良性病变的前列腺组织几乎不表达，在癌前病变的 前列腺组织（HGPIN）中低表达，激素依赖性前列腺癌组织高表达。值得注意 的是，SNCG 在激素非依赖性前列腺癌组织无表达。122 例激素依赖性前列腺癌 中，低危因素前列腺癌（PSA＜10ng/ml，Gleason 评分≤6，临床分期≤T2a）的