泽泻根茎无性系建立研究.docVIP

泽泻根茎无性系建立研究 　　摘要：为保存野生根茎大的泽泻种质，以根茎为材料，成功地建立起泽泻无性系。结果证明：MS+BA0.3mg／L+NH4H2PO450mg／L+2.4－D1.6～2.0mg／L是愈伤组织诱导和继代培养的适宜培养基MS+NAA 0.1mg／L+AgNO30.5mg／L+GA3 1.0mg／L+BA 0.9mg／L是愈伤组织分化培养的适宜培养基；1／2MS+IAA 0.2 mg／L+NAA 0.1 mg／L的液体培养基是泽泻不定芽生根培养的适宜培养基；在温室中试管苗易移栽成活，移植到材料原产地的试管苗生长旺盛，保持了根茎大的性状。 　　关键词：泽泻；组织培养；无性系 　　中图分类号：S567.239 文献标识号：A 文章编号：1001-4942(2010)07-0005-03 　　 　　泽泻(Alisma orientale)又称水泻、芒芋、泽芝，属泽泻科泽泻属多年生草本植物，生长于沼泽或人工栽培，我国的大部分地区有分布。泽泻的根茎中含泽泻醇等三萜类成分，具有利湿渗水、泄热通淋等功效，能治小便不利、水肿胀满、痰饮眩晕、泄泻和遗精等症状。其果实与叶也能人药，具有益肾气、通血脉、逐水等功效。近年来我国也多有观赏栽培。北方野生泽泻根茎一般很小，偶尔也会发现根茎较大植株，但通过种子繁殖的实生苗，后代无法保持根茎较大的性状。为此，笔者对根茎较大的野生泽泻植株进行了组织培养研究，以期使优良野生泽泻种质得到保存和有效利用。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1　材料来源 　　以大连市金州区大魏家河边生长旺盛、根茎大的泽泻为材料。 　　 　　1.2　材料灭菌 　　于5月下旬将生长旺盛、根茎大的泽泻挖回栽到温室的花盆中，然后放到盛水的花盆中，使花盆的下部完全浸在水中。待泽泻完全恢复正常生长后，将下面花盆中的水换成0.001％的HgCl2溶液，处理5d。然后将植株挖出，剪掉叶和须根，用清水洗净后放入磨口广口瓶中，用蒸馏水洗净。将其移到超净工作台上，用70％乙醇灭菌约10s，然后用0.025％的HgCl2溶液振荡灭菌14min左右，最后用无菌水反复振荡洗涤，即可获得无菌根茎。 　　 　　1.3　培养条件 　　参见李肖依等(2008)萍蓬草的组织培养及研究。 　　 　　1.4　方法 　　1.4.1　愈伤组织诱导培养将无菌根茎放到具有吸水纸的无菌培养皿中吸干表面残留液，用解剖刀切成0.2～0.3cm的块状，接种到以MS+BA0.3m／L(以下单位相同者略)+NH4H2PO450为基本培养基，添加不同浓度的2，4－D和IAA(见表1)，26℃暗培养。每种处理接种20块根茎。 　　 　　1.4.2　愈伤组织的继代培养把暗培养获得的愈伤组织在无菌培养皿中分散为独立的球状后，接种到与愈伤组织诱导成分相同的培养基上，光照、26℃恒温条件下进行愈伤组织的继代培养。每种处理接种100个材料，重复3次(以下试验重复次数和处理材料相同者略)，1次试验继代培养4代。 　　1.4.3　愈伤组织的分化培养把继代培养的愈伤组织分散为独立的颗粒后，接种到添加不同浓度细胞分裂素BA和KT(见表2)的MS+NAA0.1+AgNO30.5+GA31.0培养基上，进行愈伤组织的分化培养。 　　 　　1.4.4不定芽生根培养在MS+NAA 0.1+AgNO30.5+GA31.0+BA0.9培养基上培养到45 d，分化不定芽高1cm以上、具有5～7个叶片时，将其从基部切下，分别接种到三种深度约为0.3cm的1／2MS+IAA 0.2+NAA 0.1、1／2MS+IAA 0.2+NAA 0.3、1／2MS+IAA 0.2+NAA 0.6液体培养基上，接种的不定芽倾倒在培养基中，进行不定芽的生根培养试验。 　　1.4.5　试管苗移栽把在液体培养基中培养的试管苗移栽到下面和四周铺着塑料膜、下部为园土、上部为1～2cm水层的温室水床中。移栽后的前7～10d，水床上面搭遮阴网，防止直射光照射。移栽试验进行2次，移栽数量分别为400、600株。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1　不同浓度生长素对愈伤组织诱导培养的影响 　　培养到15d左右，部分培养材料可观察到边缘膨大，随后不断生长，至70d时统计。由表1可见，在培养基中加入不同浓度的IAA，不能诱导形成愈伤组织；加入2，4－D能够诱导形成愈伤组织，但其浓度不同，出愈率和长势不同。2，4－D浓度为1.6、2.0时，不仅出愈率达到了95％、90％，而且所诱导的愈伤组织长势好。观察还表明，在含上述两种浓度2，4－D的培养基上，诱导生长的愈伤组织初期近透明状，后来渐渐变成了黄色的不等球状。这说明MS+BA 0.3+NH4H2PO250+2，4－D 1.6～2.0的培