不同品种枇杷果皮响应高温胁迫蛋白的分离鉴定及功能分析-生物学;生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独创性声明 本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 □ 不保密，本论文属于不保密。 □ 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 指导教师亲笔签名： 福建农林大学硕士学位论文 福建农林大学硕士学位论文 目录 摘 要I AbstractIII 缩略词 V 1.前言 1 1.1 高温胁迫对植物细胞微观结构的影响 1 1.2 高温胁迫下植物的生理生化变化1 1.2.1 细胞膜的热稳定性1 1.2.2 活性氧清除系统2 1.2.3 光合作用3 1.2.4 呼吸作用3 1.3 高温胁迫下植物的信号物质变化3 1.4 高温胁迫下植物的热激蛋白变化4 1.5 高温胁迫下植物的蛋白质组学研究4 1.6 本文研究的目的和意义5 2. 试验材料与方法 5 2.1 仪器设备 5 2.2 生化试剂 5 2.3 试验材料 6 2.4 试验方法 6 2.4.1 膜透性的测定6 2.4.2 丙二醛（MDA）含量测定 7 2.4.3 多酚氧化酶（PPO）含量的测定 7 2.4.4 蛋白质酚抽提法8 2.4.5 蛋白的裂解8 2.4.6 蛋白质含量的测定9 蛋白标准曲线制作9 蛋白质含量测定9 2.4.7 等电聚焦分离10 上样和等电聚焦10 胶条平衡10 SDS电泳 11 2.4.8 考马斯亮兰染色（CBB-R250） 11 2.4.9 图像扫描及软件分析11 2.5.0 差异蛋白点的胶内切酶解11 2.5.1 差异蛋白质谱鉴定及数据库检索 12 2.5.2Western blotting 验证分析 12 3.结果与分析 13 3.1 细胞膜透性的变化和 MDA 含量的积累 13 3.2 PPO 酶活力的变化 14 3.3 枇杷果皮的差异蛋白质组分析14 3.4 差异表达蛋白的功能分类17 3.5 HSP70 免疫印迹分析 42 4 讨论 42 4.1 高温胁迫下枇杷果皮细胞膜稳定性 42 4.2 高温胁迫下枇杷果皮蛋白质组学分析 43 4.2.1 防御与胁迫相关蛋白43 4.2.2 光合作用相关蛋白45 4.2.3 次级代谢相关蛋白46 4.2.4 蛋白质合成相关蛋白47 4.2.5 碳水化合物合成相关蛋白47 5.小结 48 致谢 50 参考文献： 51 摘 要 枇杷是中国南方特有的水果之一，具有比较高的营养和药用价值；是耐寒性 比较高的亚热带果树，果实色美味佳，成熟于水果淡季春夏季节，是当今水果的 佳品，生产栽培经济效益高，具有很大的发展潜力。果实的外观是影响果实销量 的主要因素之一，而且枇杷以鲜销为主，枇杷果皮的日灼直接制约了我国枇杷在 国际鲜果市场上的占有量。 本研究采用双向电泳技术分离了高温胁迫下的不同品种枇杷果皮蛋白，经过 Image Master5.0 软件分析得到蛋白丰度表达变化量达到 2 倍以上的差异蛋白点 有 64 个，这些蛋白点经过质谱分析，有 56 个蛋白被成功鉴定。这些蛋白参与了 胁迫和防御（33.93%）、光合作用（10.71%）、碳水化合物代谢（25%）、蛋白质 合成（10.71%）、次级代谢（3.57%）、蛋白质修饰（2%）等生理过程。 在两个品种枇杷果皮中与胁迫和防御相关的蛋白都整体上调，表明枇杷果皮 在受到高温日灼胁迫时，需要抗氧化酶来清除活性氧。我们发现在‘红猴本’枇 杷中有 3 个热激蛋白上调表达，而‘金钟’枇杷中却有 6 个，这一结果可能说明 ‘金钟’对高温胁迫更为敏感，需要产生更多的热激蛋白来指导蛋白或多肽的正 确折叠，提高枇杷果