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小麦N离子束注入诱变育种应用研究 　　摘要：为了探寻新的育种手段，解决目前小麦常规育种中普遍存在的种质资源匮乏问题以提升育种效率，开展了小麦N离子束注入诱变育种与常规育种相结合的应用研究。以N离子不同剂量注入小麦品种连麦6号籽粒进行诱变处理，经过M1代损伤效应分析，M2代突变体的分类统计和筛选，M3代常规系谱法稳定性鉴定，考察了N离子注入对连麦6号农艺性状的诱变效应。结果表明：N离子注入对连麦6号的诱变效应在M1代显著地表现在株高、结实率、抽穗期和成株率上，M2代的突变率随N离子注入剂量的增加而提高，由低到高3种剂量处理的突变率分别为5.38%、8.98%和11.02%，筛选出的3个超亲变异性状（矮秆多蘖、早熟性、大穗）在M3代因不同的剂量处理其重复稳定性存在明显差异；试验明确了不同剂量的离子注入处理对小麦生理性状影响的变异效应不同。 　　关键词：小麦；N离子束；诱变育种 　　中图分类号：S512.103.52文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）07-0018-05 　　黄淮麦区是我国小麦的主产区，多年的常规杂交育种致使小麦育种的遗传背景变得单一，品种的同质化现象严重。实践中，借助远缘杂交来打破此瓶颈，又遇属间不育性障碍且很难突破。诱变育种技术在种质创新和品种改良上具有独特作用，它可以诱发基因突变，打破基因连锁，在相对较短的世代周期内获得常规育种方法难以获得的新类型、新性状、新基因，可以丰富育种材料的遗传背景。在众多诱变手段中离子束的诱变作为后起之秀倍受关注。这不仅是因为离子束生物工程的应用发端于我国[1，2]，更是因为它不象其它辐射诱变只限于能量作用引起 DNA链断裂，更有其能量、质量、电荷的三因子协同作用产生的生物分子原子移位、重组和化合的优势[3]，具有损伤轻、存活率高、突变率高和突变谱广、重复性好等特点[4～6]。 　　目前离子束诱变育种研究正在国内外蓬勃展开，涉及方面从突变体库的选择构建、品性改良、种质创新和离子束介导转基因[7～12]到以优化离子束诱变效应的诱变离子、剂量、时间及不同诱变靶标材料的对应选择方面[13～17]。从前人的这些研究成果看，离子束诱变边际效应最大化的受制因素往往与靶标材料密切相关。因此要获得好的诱变效率，诱变源的参数最佳组合必须以诱变材料为转移，不能教条地套用。为了提高处理后代的突变频率和突变类型，通常诱变育种选用对本地区生态环境适应性好、综合性状优良、遗传背景丰富且某些性状尚存在改良余地的品种为主。本院自育品种连麦6号从亲本遗传背景和生产生态适应性看大致符合这些条件，为此我们选择该品种开展了小麦N离子束注入诱变育种应用研究，试图找到一套适合本地品种和生态条件的与常规育种相得益彰互为补充的育种方法。 　　1材料与方法 　　1.1供试材料 　　供试小麦品种连麦6号为本院自产。 　　1.2辐照处理 　　离子注入委托中?肟蒲г汉戏饰镏士蒲а芯吭杭际跎?物与农业工程研究所完成。注入离子为N离子，能量为30 keV，束流大小为10 mA，真空度为10-2～10-3 Pa，注入剂量分别为2×1017 、4×1017、6×1017 N+/cm2。每个离子注入剂量处理均为1 000粒干种子。 　　1.3田间试验方法 　　试验在连云港市农业科学院玉带河试验场进行。2012年11月5日播种M1代，行距 22.5 cm，株距2 cm，每小区播种500粒，重复2次。苗期每小区定点调查田间发芽势、发芽率和成活率，考察不同剂量处理对连麦6号种子的损伤情况，同时单株挂牌跟踪调查生育期。收获前每小区随机取样20株室内考种。M1代成熟时不做选择，按处理单收主茎穗。 　　2013年10月15日对上年收获的单株主茎穗按不同诱变处理单株单行种植M2代，每单株行长1 m， 每隔10行种1行野生型连麦6号为对照，以便于对比观察。调查各处理M2代群体的生育期、株高、分蘖、穗长等农艺性状，观察记载其它性状（株、粒、叶的形状、颜色等）变异，以超野生型连麦6号（CK）不同数量性状平均值3倍标准差之外的个体作为突变株，统计各处理不同类型的突变率，同时按处理根据小麦不同生育进程有所侧重地分茎秆、熟性、穗部三大类变异性状进行株选淘汰，保留性状向优突变的变异株。 　　2014年10月20日再对中选的变异株M2代按不同的离子注入剂量处理依常规育种系谱法建立株系谱，针对所筛选的变异性状田间观察和室内考种对M3代每个株系进行稳定性重复鉴定，选择性状向优突变且遗传特性相对稳定的材料。 　　2结果与分析 　　2.1N离子束不同注入剂量对连麦6号M1代的影响 　　考虑传统的物理诱变的遗传通常表现为一代平、二代突、三代稳的特点，所以在种植M1代时特意采用了晚播密植的方法，以尽可能降低分蘖数，利于集中突显M1代主