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小麦成熟胚组织培养体系优化及优良转化受体基因型筛选 　　摘要：为建立适于优良品种遗传转化的高效组织培养体系，本研究以3种山东省推广小麦品种(济麦19、良星99、鲁麦14)和模式品种Bobwhite为材料，以成熟胚为外植体对其愈伤组织进行诱导和分化，探讨了2，4-D不同浓度下的3种诱导培养基(Ms、N6、MSB5)和4种激素配比的分化培养基对小麦成熟胚离体培养的影响。结果表明，N6培养基的诱导效果最好，平均诱导率超过了80％，且当2，4-D的浓度为4mg／L时诱导效果最佳。4种激素配比均可诱导小麦成熟胚愈伤组织分化，但分化率较低且处理之间差别较大，添加0.5mg/LIAA和2mg／L ZT的Ms培养基的平均分化率最高，为22.58％。小麦基因型的差别主要影响其分化率的高低而对诱导率的影响不大，3个品种中用于转化的最佳品种为鲁麦14。 　　关键词：小麦成熟胚；愈伤组织；诱导；分化 　　中图分类号：S512.1+10.353 　　文献标识号：A 　　文章编号：1001―4942(2010)11―O001―05 　　小麦是世界上最主要的粮食作物之一，在谷物栽培中居首位，其中普通小麦种植最广，约占全世界小麦总面积的90％。随着对小麦抗性、品质研究的深入以及常规育种的限制，应用生物技术对小麦进行品种改良越来越受人们重视，因此，必须建立起高效稳定的组织培养体系为小麦遗传转化奠定基础。 　　目前，以小麦幼胚、动穗、叶片、根、成熟胚等为外植体进行的遗传转化，都成功获得了再生植株。其中幼胚是转化成功最多的外植体，许多研究认为幼胚的愈伤组织诱导率和植株再生率都较高，但幼胚易受季节、时间限制，短时间内难以重复试验，而小麦的成熟胚则能克服幼胚的不足，具有取材方便、周期短、不受季节和植株发育阶段限制等优点，因此用作转化受体最为方便实用，但成熟胚再生率非常低。鉴于此，本试验以山东省广泛栽培的3个小麦品种为材料，对其成熟胚进行愈伤组织诱导和分化的研究，旨在探索不同主推小麦品种成熟胚诱导和分化的有效体系以及优良的转基因受体基因型，为利用转基因技术改良小麦提供依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1　植物材料 　　山东省3个小麦推广品种济麦19、良星99、鲁麦14和模式品种Bobwhite的成熟种子，均由山东农业大学小麦品质育种研究室提供。 　　 　　1.2　培养基 　　诱导培养基： 　　愈伤组织诱导培养基有3种，分别添加2、4、6mg/L 2，4－D，构成9种培养基： 　　①MS基本培养基+500mg/L水解酪蛋白+不同浓度2，4-D(2、4、6mg／L)，分别称为MS2、MS4、MS6培养基； 　　②N6基本培养基+500mg／L水解酪蛋白+不同浓度2，4-D(2、4、6mg/L)，分别称为N662、N64、N66培养基； 　　④MSB5基本培养基+500mg／L水解酪蛋白+不同浓度2，4-D(2、4、6mg／L)，分别称为MSB52、MSB54、MSB56。 　　分化培养基： 　　以MS培养基为基本培养基，因所加的激素配比不同构成4种分化培养基，如下： 　　①MS基本培养基+0.5mg/LIAA+1mg/L ZT 　　②MS基本培养基+O，5 mg／L IAA+2 m∥L ZT 　　③MS基本培养基+1mg/LIAA+lmg/LzT 　　④MS基本培养基+1mg／LIAA+2mg/LzT 　　以上所有培养基均添加30g／L蔗糖和8g／L琼脂粉，用NaOH调pH值到5.6―5.8，在121℃下经1.1kg/cm2高压湿热灭菌20min。 　　 　　1.3　方法 　　1.3.1　种子预处理 　　取颜色、大小一致的小麦种子各约500粒，用无菌ddH20冲洗一次，70％酒精处理1min，然后无菌水冲洗一次，再用无菌水浸泡，封口过夜浸泡18h，次日对种子进行消毒处理，在超净台上用1‰的升汞消毒10min，无菌水漂洗3―4次。 　　1.3.2　成熟胚培养 　　剥取成熟胚，切碎，盾片向上置于诱导培养基上(9cm培养皿平均每11／1.40―50个)，重复3次，在培养皿上标明品种、培养基、日期和胚数，25℃暗培养两周，统计出愈率。挑选生长良好的胚性愈伤组织转入分化培养基进行光照培养，光强2000lx，每天光照16h，培养温度为(25±1)℃，每两周继代培养一次，30d后统计愈伤组织分化率(随时观察，及时剔除褐化和污染愈伤)。 　　1.3.3　数据处理与分析 　　出愈率(％)=(出愈外植体数／接种外植体数)×100，弃去污染和褐化的愈伤组织不计；分化率(％)=(分化出芽的愈伤数／接种愈伤数)×100，弃去污染和褐化的愈伤组织不计； 　　采用DPS统计分析软件进行方差分析。 　　 　　2　结果