不同浓度脂多糖对哮喘大鼠气道平滑肌细胞合成分泌功能的影响及其机制的分析-呼吸内科学专业论文.docxVIP

III III 2.3.5 大鼠气道阻力的比较……………………………………………………37 2.3.6 RT-PCR 检测 TLR4 mRNA 在气道平滑肌中的表达水平……………38 2.4 讨论 ………………………………………………………………………39 参考文献………………………………………………………………………42 附图……………………………………………………………………………47 综述……………………………………………………………………………49 研究生在读期间发表的论文…………………………………………………63 致谢……………………………………………………………………………63 PAGE PAGE 10 不同浓度脂多糖对哮喘大鼠气道平滑肌细胞合 成分泌功能的影响及其机制的研究 中 文 摘 要 目的：我们将通过建立哮喘大鼠模型，从细胞水平及整体动物水平研 究不同浓度脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激哮喘大鼠气道平滑肌细 胞（Airway smooth muscle cells，ASMCs）诱导 TLR4 信号通路激活，对 哮喘大鼠 ASMCs 合成分泌的影响及其机制。 方法：用卵清蛋白(OVA)致敏并激发建立大鼠哮喘模型，分离哮喘大 鼠 ASMCs 进行原代培养，用不同浓度 LPS 刺激及抗 TLR4 抗体阻断 TLR4。 采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠 ASMCs 培养上清液分泌细 胞因子 IFN-γ、IL-4 的情况，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠 ASMCs 中 TLR4mRNA 的表达水平，从而对体外培养的 ASMCs 在不同浓 度 LPS 刺激后的分泌细胞因子的情况及 TLR4 表达水平进行研究；本课题 还通过建立大鼠哮喘模型，用不同浓度 LPS 对大鼠进行干预刺激，采用苏 木素伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理改变，RT-PCR 法检测大鼠气道平 滑肌 TLR4mRNA 的表达水平，探讨不同浓度 LPS 对哮喘大鼠气道炎症及 气道重塑的影响。 1.结果（第一部分实验） （1）ELISA 法检测各组哮喘大鼠 ASMCs 分泌细胞因子：低浓度 LPS 组（B）IL-4 蛋白含量高于空白对照组（A）（P﹤0.01）,IFN-γ蛋白含量与 空白对照组（A）比较差异无统计学意义（P0.05）；高浓度 LPS 组（C） IL-4 蛋白含量低于空白对照组（A）（P﹤0.01），IFN-γ蛋白含量高于空白 对照组（A）（P﹤0.01）；低浓度 LPS 组（B）IL-4 蛋白含量高于高浓度 LPS 组（C）（P﹤0.01），IFN-γ蛋白含量低于高浓度 LPS 组（C）（P﹤0.01）； 低浓度 LPS +TLR4 抗体组（D）IL-4 蛋白含量低于低浓度 LPS 组（B）（P ﹤0.01），IFN-γ蛋白含量与低浓度 LPS 组（B）比较差异无统计学意义 （P0.05），分别与空白对照组（A）IL-4、IFN-γ含量比较差异无统计学 意义（P0.05）；高浓度 LPS +TLR4 抗体组（E）IL-4 蛋白含量高于高浓度 LPS 组（C）（P﹤0.01），IFN-γ蛋白含量低于高浓度 LPS 组（B）（P﹤0.01）， 分别与空白对照组（A）IL-4、IFN-γ含量比较差异无统计学意义（P0.05）。 （2）RT-PCR 检测各组哮喘大鼠 ASMCs 中 TLRmRNA 表达水平：低 浓度 LPS 组(B)、高浓度 LPS 组(C)TLR4 mRNA 表达水平高于空白对照组 (A)（P﹤0.01）；高浓度 LPS 组(C)TLR4 mRNA 表达水平高于低浓度 LPS 组(B)（P﹤0.05）；低浓度 LPS +TLR4 抗体组(D)、高浓度 LPS +TLR4 抗体 组(E)TLR4 mRNA 表达水平低于空白对照组(A)（P﹤0.01）；低浓度 LPS +TLR4 抗体组(D)TLR4 mRNA 表达水平低于低浓度 LPS 组(B)（P﹤0.01）； 高浓度 LPS +TLR4 抗体组(E)TLR4 mRNA 表达水平低于高浓度 LPS 组(C) （P﹤0.01）。 2.结果（第二部分实验） (1)HE 染色观察：哮喘组（A 组）可见支气管、肺泡及肺间质充斥大 量炎症细胞，支气管壁增厚、粘膜层肿胀充血、皱折增多，平滑肌增厚， 管腔狭窄。低浓度 LPS 组（B 组）上述炎症改变无明显减轻。高浓度 LPS 组（C 组）上述症状明显减轻。正常对照组（D 组）肺组织结构正常，无 明显炎症表现。 （2）支气管壁厚度(WAt/Pi)、支气管壁平滑肌厚度(WAm/Pi)、支气管 壁平滑肌细胞核数量(N/Pi):哮喘组（A 组）、低浓度 LPS 组（B 组）及高浓 度